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耐藥細(xì)胞構(gòu)建的原理和實驗要點說明

閱讀:2054      發(fā)布時間:2021-4-18
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   耐藥細(xì)胞構(gòu)建的原理:
  細(xì)胞與低劑量的藥物長期接觸,引起細(xì)胞本身藥物化學(xué)過程的改變,細(xì)胞膜上出現(xiàn)Pgp糖蛋白,使細(xì)胞逐漸對藥物耐受,隨著藥物濃度的遞增,其耐受程度逐漸加強。
 
  耐藥細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
  1.研究的對象是活細(xì)胞
  在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
 
  2.研究條件可以人為控制
  pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,產(chǎn)品僅供科研可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
 
  3.研究的樣本可以達到比較均一性
  通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達到純化。
 
  4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
  采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
 
  耐藥細(xì)胞的實驗要點說明:
  1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
 
  2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
 
  3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
 
  4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
 
  5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

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