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上海申知心生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 高血脂癥動(dòng)物模型,心血管疾病動(dòng)物模型,缺血性心臟病動(dòng)物模型 |
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主營(yíng)產(chǎn)品： 高血脂癥動(dòng)物模型,心血管疾病動(dòng)物模型,缺血性心臟病動(dòng)物模型 |
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產(chǎn)品介紹
慢病毒（Lentivirus）載體是以 HIV-1 （人類免疫缺陷1型病毒）為基礎(chǔ)發(fā)展起來(lái)的基因治療載體。具有感染譜廣泛、可以有效感染分裂期和靜止期細(xì)胞、長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)外源基因等優(yōu)點(diǎn)，因此成為導(dǎo)入外源基因的有力工具。現(xiàn)在慢病毒系統(tǒng)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用到各種細(xì)胞系的基因過(guò)表達(dá)、RNA干擾、microRNA研究以及活體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中。
服務(wù)項(xiàng)目
公司提供慢病毒載體構(gòu)建、RNAi(shRNA)、miRNA、過(guò)表達(dá)和干擾慢病毒包裝以及基于慢病毒技術(shù)的穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建服務(wù)。
公司的慢病毒產(chǎn)品主要為第四代質(zhì)粒系統(tǒng)，其特點(diǎn)為高表達(dá)，高滴度，快速克隆和易檢測(cè)。慢病毒滴度可達(dá)到1E+8 TU/mL，不必濃縮和純化，就能感染目的細(xì)胞并且通過(guò)GFP發(fā)出的綠色熒光來(lái)篩選，可以不同實(shí)驗(yàn)者的實(shí)驗(yàn)需求，使后續(xù)的實(shí)驗(yàn)更加方便快捷。
整體實(shí)驗(yàn)流程
（一） 實(shí)驗(yàn)流程（1、2、3為并列步驟）
1. 慢病毒過(guò)表達(dá)質(zhì)粒載體的構(gòu)建 設(shè)計(jì)上下游特異性擴(kuò)增引物，同時(shí)引入酶切位點(diǎn)，采用PCR技術(shù)(采用高保真KOD酶，3K內(nèi)突變率為0%)從模板中（cDNA質(zhì)?；蛘呶膸?kù)）調(diào)取目的基因CDS區(qū)（coding sequence）連入T載體。將CDS區(qū)從T載體上切下，裝入慢病毒過(guò)表達(dá)質(zhì)粒載體。
2. 慢病毒干擾質(zhì)粒載體的構(gòu)建 合成siRNA對(duì)應(yīng)的DNA頸環(huán)結(jié)構(gòu)，退火后連入慢病毒干擾質(zhì)粒載體。
3. miRNA載體構(gòu)建從 Genomic 中調(diào)取基因相應(yīng)的Mir 前體, 并在調(diào)取引物中引入酶切位點(diǎn)。
4. 慢病毒載體的包裝與濃縮純化 制備慢病毒穿梭質(zhì)粒及其輔助包裝原件載體質(zhì)粒（兩質(zhì)粒包裝系統(tǒng)），三種質(zhì)粒載體分別進(jìn)行高純度無(wú)內(nèi)毒素抽提，共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后6 h 更換為培養(yǎng)基，培養(yǎng)48和72h后，分別收集富含慢病毒顆粒的細(xì)胞上清液，病毒上清液通過(guò)超離心濃縮病毒。
