PUREfrex®2.0無細(xì)胞蛋白合成試劑盒使用方法及組分介紹

時間：2025/4/28閱讀：162

PUREfrex®2.0于2015年推出，相比1.0的版本PUREfrex®2.0的蛋白產(chǎn)量有所提升。PUREfrex®2.0改進(jìn)了從大腸桿菌中純化的所有組分的制備方法，并優(yōu)化了因子的組成，實現(xiàn)了比PUREfrex 1.0高2-10倍的蛋白質(zhì)生產(chǎn)率。

圖2.png

圖2.PUREfrex® 1.0和PUREfrex® 2.0對比數(shù)據(jù)

PUREfrex®2.0使用方法（僅供參考，操作方法請查閱產(chǎn)品說明書）：

以20ul反應(yīng)體系為例，如果需要擴(kuò)大體積可以等比例增加對應(yīng)試劑。

1. 在室溫或37℃下保溫1分鐘使溶液I完-全融解，然后在冰上冷卻。

2. 在冰上融化溶液II和溶液III。

3. 將溶液I，溶液II和溶液III 渦旋后簡短離心收集管底內(nèi)容物。

4. 根據(jù)下列表格配置反應(yīng)液，每1kb加入模板DNA 1-3ng/ul。

Water	7-X μL
Solution I	10μL
Solution II	1μL
Solution III	1μL
Template DNA	X μL
總體積	20ul

5. 在37°C的heat block或水浴中反應(yīng) 2~4 h，合成蛋白。

6. 分析合成蛋白。通過SDS-PAGE驗證時，請用水稀釋反應(yīng)液后進(jìn)行電泳。

試劑盒組分.png

試劑盒組分（各組分中具體成分信息保密）：

組分名稱	組分內(nèi)容	保存溫度
Solution I	Amino acids, NTPs, tRNAs and substrates for enzymes etc.	-20℃
Solution II	Proteins in 30 % glycerol buffer	-20℃/-80℃
Solution III	Ribosome (20 μM)	-80℃
DHFR DNA	PCR product containing a gene encoding dihydrofolate reductase (DHFR) from E.coli as a positive control. (20 ng/μL)	-20℃

請注意：1.在打開試劑盒之前請將試劑盒儲存在-80°C的溫度下。2.溶液II和溶液III避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品信息

貨號	名稱	規(guī)格
GFK-PF201-0.25-EX	PUREfrex®2.0	1 x 250 µl
GFK-PF201-2ML-EX		2ml
GFK-PF201-10ML-EX		5 x 2 ml

當(dāng)您的蛋白質(zhì)需要分子伴侶的幫助或形成二硫鍵以形成正確的構(gòu)象時，只需向PUREfrex®2.0中添加補(bǔ)充試劑即可。

分子伴侶-幫助蛋白正確折疊，合成可溶形式蛋白質(zhì)

產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
GFK-PF003-0.5-EX	DnaK Mix	500 µl Equivalents
GFK-PF003-10ML-EX	DnaK Mix	5 x 2 ml Equivalents
GFK-PF004-0.5-EX	GroE Mix	500 µl Equivalents
GFK-PF004-10ML-EX	GroE Mix	5 x 2 ml Equivalents

幫助形成二硫鍵的添加物

產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
GFK-PF005-0.5-EX	DsbC Set	500 µl Equivalents
GFK-PF005-10ML-EX	DsbC Set	5 x 2 ml Equivalents
GFK-PF006-0.5-EX	PDI Set	500 µl Equivalents
GFK-PF006-10ML-EX	PDI Set	5 x 2 ml Equivalents

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