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Real -Time PCR，即實時監(jiān)測PCR擴增產(chǎn)物并進行解析的方法，它是在PCR反應體系中加入熒光物質(zhì)，并通過Real -Time PCR檢測系統(tǒng)對PCR反應進程中的熒光信號強度進行實時監(jiān)測，zui終對實驗數(shù)據(jù)進行分析處理的方法。Real -Time PCR自1996年由美國Applied Biosystems公司推出以來，廣泛應用于生物研究的各個領域。目前主要有SYBR Green 染料、Taqman探針法兩種。

PCR代測,PCR技術(shù)服務,熒光定量PCR
 
PCR實驗代測，熒光定量PCR代測服主要儀器及耗材
旋渦振蕩器 ：上海青浦瀘西儀器廠產(chǎn)品
手握式電動勻漿機：德國FLUKO 公司產(chǎn)品
低溫冷凍離心機：Sigma（3K15）公司產(chǎn)品
Real-time檢測儀：ABI （ABI-7300）公司產(chǎn)品
超純水分離系統(tǒng)：美國LABCONCO公司
離心管及10μL、200μL、1000μL槍頭等常規(guī)耗材均為國產(chǎn)；RNA提取過程中所需的離心管、槍頭等耗材經(jīng)過0.1%的DEPC水浸泡過一夜，121℃滅菌30min，烘干后備用。
 
PCR實驗代測，熒光定量PCR代測服實驗室試劑的操作
1)所用的所有溶液都應該沒有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
2)所有PCR試劑中使用的水都應該是高質(zhì)量的-新鮮蒸餾的去離子水，用0.22μm過濾的，并且是高壓滅菌。
3)在20℃到25℃貯存的試劑建議加點像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴增反應。
4)所用試劑都應該以大體積配制，實驗一下看試劑是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量進行貯存。
5)所有試劑和樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。
6)新配制的試劑在用于準備新的標本之前應該加以檢驗。
7)樣品準備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時都應該小心保存。

PCR代測,PCR技術(shù)服務,熒光定量PCR

本程序適用于自動PCR操作，可適用于大多數(shù)情況，所用酶是不含核酸外切酶活性的熱穩(wěn)定聚合酶，如Taq聚合酶等。 
引物（各50pmol） 0.2mmol/L dNTPs（必須使用高質(zhì)量的dNTPs，這一點非常重要。dNTPs經(jīng)反復化凍后會發(fā)生降解，因此應分成小份保存。應注意混合物中四種dNTP的量要相等） 模板DNA：約0.05～1mg基因組DNA或0.002～0.02mg質(zhì)粒DNA Taq DNA聚合酶（Perkin Elmer, Norwalk, Connecticut） 10×PCR緩沖液（500mmol/L KCl，15mmol /L MgCl₂，100mmol/L Tris·HCl，pH 8.3） 礦物油 
電泳所需試劑 
【儀器設備】 
PCR擴增儀 
電泳裝置 
微量離心機 
微量移液器（1～20ml和20～200ml） 
0.5ml Eppendorf 管 
紫外線觀察裝置及照相設備

PCR代測,,熒光定量PCR