免疫球蛋白G，即抗體，是免疫系統(tǒng)用來識別和中和病原菌和病毒等異物的Y型大蛋白，在生物學(xué)上十分重要。Protein G可以結(jié)合哺乳動物IgG，與其蛋白結(jié)構(gòu)上的Fc片段進(jìn)行特異性識別。因此可以選用月旭Welchrom® Protein G Tanrose 4FF(5mL，00081-12012)來分離純化牛初乳粉中的IgG蛋白、Welchrom® BC-10重力柱(8.3mL，00051-32022)提高純度，并采用月旭Xtimate® SEC-300（7.8×300mm，5μm）進(jìn)行色譜檢測分析實驗結(jié)果。
01分離純化實驗步驟
（1）牛初乳樣品預(yù)處理
① 去除脂肪及酪蛋白：
A. 取3g牛初乳粉溶于20mM PB中，漩渦震蕩混勻充分溶解，定容至30mL ，濃度為1g/mL。
（可滴加少許消泡劑，約4μL/mL）
B.用6M HCl調(diào)pH至4.5，37℃ 水浴35min，9000r/min 離心20min，棄沉淀，保留上清。
② 去β-乳球蛋白：
將上述上清用10M NaOH回調(diào)pH至7.0，9000r/min 離心20min，棄沉淀，保留上清。
③ 去除小分子雜蛋白及脫鹽濃縮樣品：
將上述上清倒入30kDa超濾管中，8000r/min 離心10min，收集截留液。
④ 除微生物雜質(zhì)：
將截留液過0.45μm濾膜，準(zhǔn)備上樣。
（2）Protein G 4FF親和純化（280nm）
（3）SDS-PAGE電泳測定純度
① 10×電泳緩沖液配置（1L）：
② 上樣：
按4:1=樣品：5×Loading Buffer 的比例加入上樣緩沖液混勻，沸水浴5-10min，據(jù)樣品情況選擇上樣量，Marker 5μL/孔，濃縮膠80V 20min，分離膠120V 60min電泳。
③ 染色及脫色：
用染色液染色30min，用蒸餾水清洗后，查看結(jié)果。
（4）BC-10重力柱脫鹽（8.3mL）
02 檢測分析實驗步驟
液相色譜檢測
03 目標(biāo)蛋白凍干保存
①超濾濃縮 → ②-20℃預(yù)凍干 → ③-80℃真空凍干 → ④凍干樣品復(fù)溶純度色譜檢測 → 蛋白凍干-20密封保存。
04 結(jié)果如圖
05 結(jié)論
采用月旭Welchrom® PreCot Protein G 4FF（5mL，00081-12012）與月旭Welchrom® BC-10重力柱（8.3mL，00051-32022）兩種層析柱進(jìn)行二次層析，可以使樣品純度達(dá)到97%，再經(jīng)30kD超濾管進(jìn)行濃縮可進(jìn)一步提升樣品純度，經(jīng)月旭Xtimate® SEC-300（7.8×300mm，5μm）色譜檢測純度達(dá)到99.86%。
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