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技術(shù)文章

凝膠色譜柱清洗方法

閱讀:2646          發(fā)布時(shí)間:2016-12-27

親水性乙烯基樹脂基質(zhì)蛋白分離用色譜柱,除了可選用鍵合了離子交換基團(tuán)的離子交換柱外,還可選用疏水反應(yīng)、親和等其他多種類型的柱子。
     這些類型的色譜柱,其充填介質(zhì)化學(xué)穩(wěn)定性好,不易發(fā)生由于官能基脫落而導(dǎo)致樣品組分洗脫位置變化的現(xiàn)象。盡管如此,由于柱子的反復(fù)使用,在長(zhǎng)時(shí)間使用后,樣品組分的洗脫情況還是會(huì)發(fā)生改變的。其原因與樣品中極微量的附吸物在柱中的蓄積有關(guān)。特別由于生物樣品組分復(fù)雜,這種吸附現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。(非特異性吸附)當(dāng)觀察到這樣的現(xiàn)象后,應(yīng)使用合適的溶劑將蓄積的吸附物質(zhì)去除,以恢復(fù)柱子的性能。

1、0.1-0.2mol/L NaOH水溶液(ABA-5PW柱不適用)
測(cè)定狀態(tài)下,用0.1-0.2mol/L的NaOH水溶液通過樣品進(jìn)樣閥清洗數(shù)次(3-5回)。
2、20-40% 醋酸水溶液
與上述NaOH水溶液的清洗方法相同。
3、在淋洗液中添加水溶性有機(jī)溶劑(疏水性吸附物質(zhì)的去除)
在淋洗液中添加甲醇、乙腈等水溶性有機(jī)溶劑(濃度《20%)進(jìn)行過柱清洗。(注意鹽的析出)
4、在淋洗液中添加尿素、中性界面活性劑(難溶性蛋白的去除)
在淋洗液中添加6-8mol/L的尿素或0.2-0.3%的中性界面活性劑(Triton、Tween、Brij等)后進(jìn)行過柱清洗。但需注意尿素及界面活性劑的柱中殘留。

     通常情況下,使用方法1和2便可將吸附物質(zhì)去除。如果方法1和2不能恢復(fù)柱效,則可使用方法3和4。注意,在附吸成分其吸附力較強(qiáng)時(shí),即使進(jìn)行過清洗,柱性能也有可能得不到恢復(fù)

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