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細胞常見的轉(zhuǎn)染方法分析

時間:2017/6/13閱讀:603
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ATCC細胞常見的轉(zhuǎn)染方法有:

1. 磷酸鈣法:該方法利用磷酸鈣DNA 復合物吸附細胞膜被細胞內(nèi)吞原理得到瞬時或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染結(jié)果,操作簡便但重復性差,不可用于原代細胞的轉(zhuǎn)染。

2. DEAE-右旋糖苷法:帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內(nèi)吞,可用于瞬時轉(zhuǎn)染,方法相對簡便、結(jié)果可重復但對細胞有一定的毒副作用。

3. 電穿孔法:利用高脈沖電壓破壞細胞膜電位,DNA通過膜上形成的小孔導入。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時轉(zhuǎn)染均適用。適用性廣但細胞致死率高,DNA 和細胞用量大, 需根據(jù)不同細胞類型優(yōu)化電穿孔實驗條件。

4. 病毒介導法:通過侵染宿主ATCC細胞將外源基因整合到染色體中。適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,可用于難轉(zhuǎn)染的細胞、原代細胞,體內(nèi)細胞等。

5. 陽離子脂質(zhì)體法:帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內(nèi)吞從而形成穩(wěn)定轉(zhuǎn)染或瞬時性轉(zhuǎn)。該方法適用性廣,轉(zhuǎn)染效率高,重復性好,但轉(zhuǎn)染時需除血清。轉(zhuǎn)染效果隨細胞類型變化大。

6. 顯微注射法:用顯微操作將DNA 直接注入靶細胞核,適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染細胞數(shù)有限,多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細胞。

除上述傳統(tǒng)方法外,近年來上推出了一些陽離子聚合物基因轉(zhuǎn)染技術(shù),以其適用宿主范圍廣,操作簡便對細胞毒性小,轉(zhuǎn)染效率高受到研究者們的青睞。其中樹枝狀聚合物(Dendrimers)和聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的轉(zhuǎn)染性能*,但樹枝狀聚合物的結(jié)構(gòu)不易于進一步改性,且其合成工藝復雜。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個碳個原子,即每“第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH 下都能充當有效的“質(zhì)子海綿”(proton sponge)體。這種聚陽離子能將各種報告基因轉(zhuǎn)入各種種屬細胞,其效果好于脂質(zhì)聚酰胺,經(jīng)進一步的改性后,其轉(zhuǎn)染性能好于樹枝狀聚合物,而且它的ATCC細胞毒性低。大量實驗證明,PEI 是非常有希望的基因治療載體。

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