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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第10年

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細(xì)胞分裂指數(shù)操作說(shuō)明書

時(shí)間:2017/6/29閱讀:914
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【實(shí)驗(yàn)用品】

材料:貼壁培養(yǎng)的ATCC細(xì)胞

器材:離心機(jī)、顯微鏡、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

試劑:Hanks液、0.25%胰蛋白酶、含10%小牛血清/胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基(根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要也可以是其他種類的培養(yǎng)基)

【實(shí)驗(yàn)步驟】

(1)用胰蛋白酶消化處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的單層培養(yǎng)細(xì)胞,細(xì)胞置于10ml離心管中,1000r/min離心5min,棄上清。

(2)加入含血清的DMEM培養(yǎng)基,制備單細(xì)胞懸液。

(3)吹打均勻后,對(duì)ATCC細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。

(4)按2x104~5x104/ml的密度將細(xì)胞接種到24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中。

(5)每天用胰蛋白酶對(duì)其中3孔細(xì)胞進(jìn)行消化,并進(jìn)行計(jì)數(shù);

(6)同時(shí)平行取3孔用95%酒精固定,吉姆薩或HE染色,選擇細(xì)胞密度適中的區(qū)域觀察分裂相細(xì)胞,至少選擇3個(gè)視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞,計(jì)算出每1000個(gè)細(xì)胞中的處于分裂相細(xì)胞的平均數(shù)值進(jìn)而得出分裂相所占百分比。

(7)以培養(yǎng)時(shí)間作為橫坐標(biāo),分別以細(xì)胞分裂相百分比(左側(cè))與每孔測(cè)得的平均細(xì)胞數(shù)(右側(cè))作為縱坐標(biāo)繪制曲線。

【結(jié)果分析】

將細(xì)胞分裂指數(shù)與細(xì)胞生長(zhǎng)曲線融合在一起可以清晰地觀察到ATCC細(xì)胞增殖的趨勢(shì)與增殖zui旺盛的時(shí)段。

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