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間質干細胞成脂和成骨誘導分化

時間:2017/7/18閱讀:569
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成骨和成脂誘導是鑒定干細胞的一種重要的方法,也是zui常用、報道見得zui多的方法。成骨zui常用的染色方法是茜素紅染色(堿性磷酸酶),成脂誘導zui常用是Oil Red O (油紅O)染色法。下面介紹一下這兩種染色方法的原理和步驟。
成骨誘導分化
茜素紅染色方法和原理:茜素紅又名茜素磺酸鈉,茜素S,茜素紅S,茜素胭脂紅,1,2-二羥基蒽醌-3-磺酸鈉,1,2-二羥基蒽醌-3-磺酸鈉鹽。橙黃色或黃棕色粉末。易溶于水,微溶于乙醇,不溶于苯。1%水溶液pH 為2.15,其水溶液呈淺黃褐色,加鹽酸后變成黃色,加氫氧化鈉后則變成藍紫色。有刺激性。能與許多金屬離子生成帶色化合物,能與鋯、釷、鋁、鈦及鈹和鈣的顯色反應。染色的原理就是茜素紅和鈣發(fā)生顯色反應,產生一種深紅色的帶色化合物,這樣成骨誘導的細胞外面沉積的鈣結節(jié)也就被染成了深紅色。

成骨誘導的過程是使鈣離子能夠以鈣鹽的方式沉淀下來,這就是我們常說的“鈣結節(jié)”。鑒定鈣結節(jié)的染色方法常用“茜素紅”。

步驟:
(1)吸去誘導液,再PBS 洗一到兩次;
(2)加入10%中性甲醛,固定30min-60min;
(3)吸去固定液,加入0.1%的茜素紅染色液,染色6-10min;
(4)用PBS 洗兩次,去處殘留的染色液;
(5)加入PBS,完成染色。
干細胞成脂誘導分化
Oil Red O(油紅O)染色的方法和原理:Oil Red O(油紅O)又名為1-[2,5-二甲基-4-(2,5-二甲基苯偶氮)苯偶氮]-2 萘酚,蘇丹紅5B,溶劑紅27。紅色粉末。是一種油溶性偶氮染料。易溶于苯,溶于乙醇(呈淺黃色紅色)和丙酮。生物染色劑,淀粉凝膠電泳中作類脂和脂肪染色。顯微技術中用作脂肪染色劑。作為脂肪細胞的染色劑的原理是使用Oil Red O 的油溶性,對其它的細胞結構著色性差。

成脂肪誘導的過程中,細胞在胞漿中不斷有油滴的累積,并不斷的增加變大,zui后整個細胞的胞漿中都是油滴。Oil Red O染色的方法是對油滴的染色的一種方法。

步驟:
(1)吸去誘導液,再PBS 洗一到兩次;
(2)加入10%中性甲醛,固定60min;
(3)吸去固定液,加入現(xiàn)配和過濾后的Oil Red O 染色液,染色60min;
(4)用PBS 洗2-5 次,去處殘留的染色液和殘渣;
(5)干細胞加入PBS,完成染色。

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