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轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中的準(zhǔn)備工作

時間:2017/7/25閱讀:497
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一、轉(zhuǎn)化細(xì)胞準(zhǔn)備工作
 
準(zhǔn)備工作對開展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要,推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實驗失敗或無法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無菌室或超凈臺的清潔與消毒,培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試等。
 
1、清潔、消毒、液體
 
直接接觸細(xì)胞的用品要超凈處理——無非必須分子
 
直接接觸細(xì)胞的用品要*消除微生物
 
超凈和消毒過的樣品要密閉保存,標(biāo)記消毒時間
 
實驗室保持潔凈,隨時消毒
 
盡量采用商品化一次性用品
 
操作者也要清潔和消毒
 
緩沖液要符合生理滲透壓(280~310 mOsm)和pH(7.2~ 7.4 )
 
2、玻璃器皿超凈
 
去污劑煮沸30min(超聲波震蕩30min) 溫水刷洗 流水沖洗 酸性洗滌液浸泡 流水沖洗 蒸餾水沖洗 純水漂洗 在潔凈溫箱中烤干 密封消毒
 
3、消毒
 
干熱——玻璃器皿  160℃,120min
 
濕熱(高壓,120 ℃ )  10~20磅,20~30min
 
紫外線——空氣
 
消毒劑——場面
 
微孔過濾——液體  0.22um、0.45um
 
二、轉(zhuǎn)化細(xì)胞生長的條件和培養(yǎng)基要求:
 
選擇合適的培養(yǎng)基,保證全過程的無菌
 
細(xì)胞的營養(yǎng)需要:氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)離子、蛋白質(zhì)、促生長因子。其中很多成分系用血清、胚胎浸出液等提供,在很多情況下還需加入10%的胎?;蛐律Q?。
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培養(yǎng)基的制備:a..濃度要準(zhǔn)-滲透壓、b. 酸堿度要適宜-酸度計
 
轉(zhuǎn)化細(xì)胞的生存環(huán)境:a.. 溫度、b.氣相、 c.滲透壓--290mmol/L

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