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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第10年

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干細(xì)胞溶解操作方法及注意事項(xiàng)

時(shí)間:2018/5/29閱讀:6367
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干細(xì)胞因子中不含載體蛋白(Carrier Protein)或其他添加劑(如BSA、HAS或蔗糖等),并且通常以zui少量的鹽來進(jìn)行凍干處理,因此微量的細(xì)胞因子在凍干過程中會(huì)沉積于管內(nèi),形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產(chǎn)品后,務(wù)必在開蓋前先離心,使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底(此時(shí)能否見到白色沉淀均屬正?,F(xiàn)象)。

1.離心:高速離心 (10, 000 rpm) 20-30 秒,或低速離心 (2, 000 rpm) 5 分鐘。

2.溶解(Reconstitution):用去離子水或其它緩沖液(根據(jù)說明書要求進(jìn)行選擇)溶解至說明書要求的濃度 (一般為 0.1-1.0 mg/mL,如10ug的產(chǎn)品,需用10uL-100uL的去離子水或緩沖液溶解)。溶解時(shí)不可振蕩,避免因化學(xué)鍵的斷裂造成蛋白失活,可加入適當(dāng)?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時(shí)間,待細(xì)胞因子*溶解后使用。溶劑的選擇:
1)要求用去離子水溶解的產(chǎn)品,務(wù)必不可用鹽溶液,避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出;

2) 要求用鹽溶液溶解的產(chǎn)品,請(qǐng)依照說明書上的濃度,同樣也是為了避免過高的鹽濃度。

3.分裝和貯存(Aliquot and Storage):蛋白溶解后可根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)一步稀釋成工作液,稀釋可用RPMI 1640、DMEM或PBS等溶液,其中含有5-10%的FCS (小牛或胎牛血清)或0.5 %的BSA(牛血清白蛋白)來穩(wěn)定蛋白。工作液在4℃可保存1周,如需長期保存,則需分裝凍存于-20℃ (注意:不可凍存于-80℃)。干細(xì)胞分裝時(shí)每管中工作液的體積是一次實(shí)驗(yàn)的用量,以實(shí)現(xiàn)每次實(shí)驗(yàn)用完一只工作液,避免反復(fù)凍融引起蛋白活性的降低。

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干細(xì)胞

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