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小鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA試劑盒?操作步驟

時間:2022/1/11閱讀:215
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小鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA試劑盒操作步驟:


1.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。


2.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  


3.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用


4.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。


5.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。


6.         溫育:操作同3。


7.         洗滌:操作同5。


8.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.


9.         終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。


10.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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