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轉(zhuǎn)化細(xì)胞經(jīng)典轉(zhuǎn)染技術(shù)

時間:2018-3-9閱讀:139
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轉(zhuǎn)化細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)的廣泛使用促進了人們對外源基因在哺乳動物細(xì)胞中的表達等方面的認(rèn)識,并在方法學(xué)上促進了該領(lǐng)域及相關(guān)領(lǐng)域的發(fā)展。從磷酸鈣到脂質(zhì)體,到多胺,可用于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞種類已越來越多,轉(zhuǎn)染試劑也不斷更新?lián)Q代,而轉(zhuǎn)染也不再于將DNA轉(zhuǎn)入細(xì)胞中了,RNA,siRNA,蛋白質(zhì)等等生物大分子也進入了轉(zhuǎn)染的行列。
DEAE-葡聚糖(Diethylaminoethyl (DEAE)-dextran):這個早在1965年出現(xiàn)的轉(zhuǎn)染方法差不多是zui古董級的方法之一了,直到現(xiàn)在竟然還有少數(shù)人堅持采用。帶正電的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚體可以結(jié)合帶負(fù)電的DNA分子,使得DNA復(fù)合物結(jié)合在帶負(fù)電的細(xì)胞表面。通過使用DMSO或甘油獲得的滲透休克,也可能是細(xì)胞內(nèi)吞作用,使得DNA復(fù)合體進入細(xì)胞。DEAE-葡聚糖于瞬時轉(zhuǎn)染,可重復(fù)性好,轉(zhuǎn)染時要除掉血清。 
磷酸鈣共沉淀轉(zhuǎn)染:zui早是在1973年開始采用的。氯化鈣+DNA+磷酸緩沖液按一定的比例混合,形成的極微小的磷酸鈣-DNA復(fù)合物沉淀粘附到細(xì)胞膜表面,借助內(nèi)吞作用進入細(xì)胞質(zhì)。沉淀顆粒的大小和質(zhì)量對于轉(zhuǎn)染的成功至關(guān)重要,pH值,鈣離子濃度,DNA濃度,沉淀反應(yīng)時間,細(xì)胞孵育時間乃至各組分加入順序和混合的方式都可能對結(jié)果產(chǎn)生影響,重復(fù)性不佳?,F(xiàn)在還會操作這種古董級方法的人怕已經(jīng)不多啦。比起DEAE法這個更容易得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,但是轉(zhuǎn)原代細(xì)胞比較困難的。
電穿孔法:通過短暫的高場強電脈沖處理細(xì)胞,沿細(xì)胞膜的電壓差異會導(dǎo)致細(xì)胞膜暫時穿孔。DNA被認(rèn)為是穿過孔擴散到細(xì)胞內(nèi)。電脈沖和場強的優(yōu)化對于成功的轉(zhuǎn)染非常重要,因為過高的場強和過長的電脈沖時間會不可逆地傷害細(xì)胞膜而裂解細(xì)胞。理論上說轉(zhuǎn)化細(xì)胞電穿孔法可用于各種細(xì)胞,而且不需要另外采購特殊試劑。可是需要昂貴的設(shè)備——這個一次性投資可不便宜,而且每次轉(zhuǎn)染需要更多的細(xì)胞和DNA——因為細(xì)胞死亡率高。每種細(xì)胞電轉(zhuǎn)的條件都需要進行多次優(yōu)化。
125mg        298-59-9     鹽酸哌甲酯標(biāo)準(zhǔn)品
125mg        3105-68-8     鹽酸氟奮乃靜庚酸酯標(biāo)準(zhǔn)品
150mg    Zileuton    111406-87-2     齊留通標(biāo)準(zhǔn)品
150mg    Verapamil Related Compound F    1993/3/8    維拉帕米相關(guān)物質(zhì)F標(biāo)準(zhǔn)品
150mg    Urea C 13     58069-82-2     尿酸C13標(biāo)準(zhǔn)品
150mg    Topiramate     97240-79-4     托吡酯標(biāo)準(zhǔn)品
150mg    misartan     144701-48-4     替米沙坦標(biāo)準(zhǔn)品
150mg    Tacrolimus     109581-93-3     他克莫司標(biāo)準(zhǔn)品
150mg    Succinylmonocholine Chloride    5297-17-6     氯琥珀酰單膽堿標(biāo)準(zhǔn)品
150mg    Salsalate     552-94-3     雙水楊酸酯標(biāo)準(zhǔn)品
150mg    Salmeterol Xinafoate     94749-08-3     昔美酸沙美特羅標(biāo)準(zhǔn)品
轉(zhuǎn)化細(xì)胞

 

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