小鼠肺成纖維樣細(xì)胞；2011109L說(shuō)明書(shū)【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱(chēng) 小鼠肺成纖維樣細(xì)胞；2011109L說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞系來(lái)源于一雄性昆明小鼠的肺組織。2011年由中科院昆明細(xì)胞庫(kù)建立。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法  1:2傳代；3-4天一次
傳代情況 P2
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類(lèi)

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

人凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶I試劑盒規(guī)格型號(hào)：96T/48T人凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶I試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶I試劑盒、人凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶Ielisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個(gè)月。
人表皮角試劑盒規(guī)格型號(hào)：96T/48T人表皮角試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人表皮角試劑盒、人表皮角elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個(gè)月。
人鼻咽癌試劑盒規(guī)格型號(hào)：96T/48T人鼻咽癌試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人鼻咽癌試劑盒、人鼻咽癌elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個(gè)月。
人骨粘連試劑盒規(guī)格型號(hào)：96T/48T人骨粘連試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人骨粘連試劑盒、人骨粘連試劑盒elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個(gè)月。
人白細(xì)胞共同抗原試劑盒規(guī)格型號(hào)：96T/48T人白細(xì)胞共同抗原試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人白細(xì)胞共同抗原試劑盒、人白細(xì)胞共同抗原elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個(gè)月。
人L氨解氨酶試劑盒規(guī)格型號(hào)：96T/48T人L氨解氨酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人L氨解氨酶試劑盒、人L氨解氨酶elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個(gè)月。
人甘露聚結(jié)合凝集相關(guān)絲氨酶試劑盒規(guī)格型號(hào)：96T/48T人甘露聚結(jié)合凝集相關(guān)絲氨酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人甘露聚結(jié)合凝集相關(guān)絲氨酶試劑盒、人甘露聚結(jié)合凝集相關(guān)絲氨酶elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個(gè)月。
人基質(zhì)γ羧基谷氨試劑盒規(guī)格型號(hào)：96T/48T人基質(zhì)γ羧基谷氨試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人基質(zhì)γ羧基谷氨試劑盒、人基質(zhì)γ羧基谷氨elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個(gè)月。150U        NotI
1mL        5-Fluorouracil(5- 氟脲嘧啶 )
10mg        5-Carboxyfluorescein succinimidyl ester
30 次        一站式長(zhǎng)效期 SDS-PAGE 電泳套裝 (2-30KD)
Actin-Tracker Green( 微絲綠色熒光探針 )    0.2mL    22-0070-0.2
10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌帶芯 )    96 支    17-012-96
1mL        胚胎裂解液
500U        Bst DNA 聚合酶，全長(zhǎng)
1mg        PMA/TPA (PKC 激活劑 )
100 次        血液保存和 DNA 純化套裝
SB203580(p38MAPK 抑制劑 )    1mg    23-0650-1
柱式動(dòng)物線粒體 DNAout，PCR     50 次    80803-50
10mL        RNase-free DTT 溶液 ,1M
20L        超快核酸電泳液干粉 
200 次        柱式血液 DNAout
10mL        制霉菌素溶液 ,2mg/mL
ATP 酶測(cè)試盒 ( 組織及細(xì)胞膜不需高速離心 )    50 T    18-0020-50
DNA  PVP K30 溶液，20%    100mL    100865-100
5000U        SP6 RNA 聚合酶
100 次        DNA PAGE 膠回收試劑盒
1.5mL        酵母 tRNA 溶液 B( 精提 )
1mL        JM103 菌種
p19miRNA 檢測(cè)試劑盒     50 次    130703-50