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雜交瘤技術(shù)的原理

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B淋巴細(xì)胞接受抗原刺激后,能分泌針對該抗原的特異性抗體,是重要的體液免疫細(xì)胞。B淋巴細(xì)胞本身是一種終末分化細(xì)胞,通常不再進(jìn)行細(xì)胞分裂。骨髓瘤細(xì)胞是惡性增殖的轉(zhuǎn)化細(xì)胞,通過細(xì)胞融合技術(shù)將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,所產(chǎn)生的融合細(xì)胞既具有親本骨髓瘤細(xì)胞的無限繁殖的生物學(xué)特性,又具有另一親本B淋巴細(xì)胞合成、分泌特異性抗體的能力。
B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)的原理可以從以下三個關(guān)鍵之處來闡明:

首先是細(xì)胞融合劑的選擇,使用細(xì)胞融合劑造成細(xì)胞膜一定程度的損傷,使細(xì)胞易于相互粘連而融合在一起。*的融合效果應(yīng)是zui低程度的細(xì)胞損傷而又產(chǎn)生zui高頻率的融合。聚乙二醇(PEG1000~2000)是目前zui常用的細(xì)胞融合劑,一般應(yīng)用濃度為40% (W/V)。

其次,細(xì)胞融合的選擇培養(yǎng)基中有3種關(guān)鍵成分:次黃嘌呤( hypoxanthine, H )、甲氨蝶吟( aminopterin, A)和胸腺嘧啶核苷(thymidine, T ),所以取三者的字頭稱為HAT培養(yǎng)基。甲氨蝶吟是葉酸的拮抗劑,可阻斷瘤細(xì)胞利用正常途徑合成DNA,而融合所用的瘤細(xì)胞是經(jīng)毒性培養(yǎng)基選出的HGPRT-細(xì)胞株,所以不能在該培養(yǎng)基中生長。只有融合細(xì)胞具有親代雙方的遺傳性能,能在HAT培養(yǎng)基中長期存活與繁殖。

第三,細(xì)胞融合是隨機(jī)的過程,在已經(jīng)融合的細(xì)胞中有相當(dāng)比例的無關(guān)細(xì)胞的融合體,需經(jīng)篩選去除。篩選過程一般分為兩步進(jìn)行:一是融合細(xì)胞的抗體篩選,二是在此基礎(chǔ)上進(jìn)行的特異性抗體篩選,從而找出針對目標(biāo)抗原的抗體陽性細(xì)胞株,增殖后進(jìn)行凍存、體外培養(yǎng)或動物腹腔接種培養(yǎng),這一過程稱作克隆化。

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