雜交瘤技術(shù)的原理

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B淋巴細胞接受抗原刺激后，能分泌針對該抗原的特異性抗體，是重要的體液免疫細胞。B淋巴細胞本身是一種終末分化細胞，通常不再進行細胞分裂。骨髓瘤細胞是惡性增殖的轉(zhuǎn)化細胞，通過細胞融合技術(shù)將B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，所產(chǎn)生的融合細胞既具有親本骨髓瘤細胞的無限繁殖的生物學特性，又具有另一親本B淋巴細胞合成、分泌特異性抗體的能力。
B淋巴細胞雜交瘤技術(shù)的原理可以從以下三個關(guān)鍵之處來闡明：

首先是細胞融合劑的選擇，使用細胞融合劑造成細胞膜一定程度的損傷，使細胞易于相互粘連而融合在一起。*的融合效果應(yīng)是zui低程度的細胞損傷而又產(chǎn)生zui高頻率的融合。聚乙二醇（PEG1000～2000）是目前zui常用的細胞融合劑，一般應(yīng)用濃度為40% (W/V)。

其次，細胞融合的選擇培養(yǎng)基中有3種關(guān)鍵成分：次黃嘌呤( hypoxanthine, H )、甲氨蝶吟( aminopterin, A）和胸腺嘧啶核苷(thymidine, T )，所以取三者的字頭稱為HAT培養(yǎng)基。甲氨蝶吟是葉酸的拮抗劑，可阻斷瘤細胞利用正常途徑合成DNA，而融合所用的瘤細胞是經(jīng)毒性培養(yǎng)基選出的HGPRT-細胞株，所以不能在該培養(yǎng)基中生長。只有融合細胞具有親代雙方的遺傳性能，能在HAT培養(yǎng)基中長期存活與繁殖。

第三，細胞融合是隨機的過程，在已經(jīng)融合的細胞中有相當比例的無關(guān)細胞的融合體，需經(jīng)篩選去除。篩選過程一般分為兩步進行：一是融合細胞的抗體篩選，二是在此基礎(chǔ)上進行的特異性抗體篩選，從而找出針對目標抗原的抗體陽性細胞株，增殖后進行凍存、體外培養(yǎng)或動物腹腔接種培養(yǎng)，這一過程稱作克隆化。

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