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826次B淋巴細胞接受抗原刺激后,能分泌針對該抗原的特異性抗體,是重要的體液免疫細胞。B淋巴細胞本身是一種終末分化細胞,通常不再進行細胞分裂。骨髓瘤細胞是惡性增殖的轉化細胞,通過細胞融合技術將B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合,所產生的融合細胞既具有親本骨髓瘤細胞的無限繁殖的生物學特性,又具有另一親本B淋巴細胞合成、分泌特異性抗體的能力。
B淋巴細胞雜交瘤技術的原理可以從以下三個關鍵之處來闡明:
首先是細胞融合劑的選擇,使用細胞融合劑造成細胞膜一定程度的損傷,使細胞易于相互粘連而融合在一起。*的融合效果應是zui低程度的細胞損傷而又產生zui高頻率的融合。聚乙二醇(PEG1000~2000)是目前zui常用的細胞融合劑,一般應用濃度為40% (W/V)。
其次,細胞融合的選擇培養(yǎng)基中有3種關鍵成分:次黃嘌呤( hypoxanthine, H )、甲氨蝶吟( aminopterin, A)和胸腺嘧啶核苷(thymidine, T ),所以取三者的字頭稱為HAT培養(yǎng)基。甲氨蝶吟是葉酸的拮抗劑,可阻斷瘤細胞利用正常途徑合成DNA,而融合所用的瘤細胞是經毒性培養(yǎng)基選出的HGPRT-細胞株,所以不能在該培養(yǎng)基中生長。只有融合細胞具有親代雙方的遺傳性能,能在HAT培養(yǎng)基中長期存活與繁殖。
第三,細胞融合是隨機的過程,在已經融合的細胞中有相當比例的無關細胞的融合體,需經篩選去除。篩選過程一般分為兩步進行:一是融合細胞的抗體篩選,二是在此基礎上進行的特異性抗體篩選,從而找出針對目標抗原的抗體陽性細胞株,增殖后進行凍存、體外培養(yǎng)或動物腹腔接種培養(yǎng),這一過程稱作克隆化。
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