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細胞毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟

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1)在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細胞,稀釋到常規(guī)細胞傳代的濃度。
2)分散細胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi),把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,兩性霉素B推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0mg/ml。
3)每天觀測細胞毒性指標,如脫落,出現(xiàn)空泡,匯合度下降和變圓。
4)確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞2-3代。
5)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞一代。
6)重復(fù)步驟4。
7)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代,確定污染是否以已被消除。

 

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