1.腫瘤細(xì)胞目標(biāo)長度為18–30個(gè)核苷酸。

2.嘗試將熔解溫度限制在55至65?C，溫度相差小于5?C。

3.如果引物的Tm值較低，則尋找G和C含量更高的序列，或者稍微延長引物的長度。

4.GC的目標(biāo)含量為40-60%，3’端的C或G可促進(jìn)結(jié)合。

5.一般在引物的5’限制性位點(diǎn)處添加3-4個(gè)核苷酸，以實(shí)現(xiàn)切割。

6.避免二級(jí)結(jié)構(gòu)區(qū)，富含GC和富含AT的結(jié)構(gòu)域應(yīng)分布均衡。

7.避開連續(xù)四個(gè)或更多的同一堿基重復(fù)或二核苷酸重復(fù)。

8.避免引物之間的互補(bǔ)（引物內(nèi)有超過三個(gè)堿基互補(bǔ)）或引物內(nèi)部形成互補(bǔ)（正向和反向引物具有互補(bǔ)序列）。

9.如果您將引物用于克隆，我們推薦采用卡套柱純化，以達(dá)到zui低純度水平。

10.如果您將腫瘤細(xì)胞引物用于突變實(shí)驗(yàn)，則在引物中間設(shè)計(jì)錯(cuò)配堿基。
 NCK銜接因子蛋白2IgG     細(xì)胞色素c氧化酶7A2    小鼠糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)
 Nemo樣激酶IgG     細(xì)胞色素C氧化酶亞基3    小鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)
 NFAM1IgG     細(xì)胞色素c氧化酶COX7A2    小鼠糖原合成酶激酶(GSK)
 NFkB誘導(dǎo)的激酶IgG     細(xì)胞色素C氧化酶亞基6B    小鼠糖皮質(zhì)類固醇受體(GR)
 NF-κB活化激酶IgG     激活素受體2A    小鼠糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)
 NK細(xì)胞表面抑制性受體CD94IgG     β-抑制蛋白1    小鼠糖蛋白130(gp130)
 NK細(xì)胞受體/自然殺傷細(xì)胞活化性受體IgG     磷酸化β抑制蛋白1    小鼠碳酸酐酶2(CA-2)
 NK細(xì)胞受體2A/自然殺傷細(xì)胞活化性受體2AIgG     β-抑制蛋白2    小鼠碳酸酐酶(CA)
腫瘤細(xì)胞