腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染目前已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因表達(dá)的重要手段。本文整理了一些關(guān)于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作及一些實(shí)驗(yàn)過程中的小貼士，希望這些信息能夠幫助各位科研君們做好轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)及提高實(shí)驗(yàn)效率。

① 從健康細(xì)胞開始
Ⅰ 轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前，細(xì)胞解凍后傳代3–4次。 這使得細(xì)胞從解凍過程中恢復(fù)過來，并恢復(fù)正常的生長速度。
Ⅱ 僅使用活性 >90%的細(xì)胞——使用臺盼藍(lán)染色可輕松測定細(xì)胞活性。
Ⅲ 定期傳代細(xì)胞，切勿讓細(xì)胞長到匯合狀態(tài)或過度生長。如果讓細(xì)胞長到匯合狀態(tài)，可能會改變細(xì)胞的生長速度以及形態(tài)。
a. 請?jiān)趨R合率達(dá)到90%之前對細(xì)胞進(jìn)行傳代。我們建議您使用胰酶替代物Cellstripper™試劑(Corning 25-056-CI)使細(xì)胞脫壁。Cellstripper™試劑可于室溫下存儲在通風(fēng)櫥中。可通過添加過量的Cellstripper™來跳過PBS洗滌的步驟，然后吸棄全部液體，僅留可覆蓋瓶子表面的液體。
* 非酶類細(xì)胞分離溶液，其配方是螯合劑的配方，可溫和分離組織培養(yǎng)物的貼壁細(xì)胞。性質(zhì)比胰酶更溫和。
b. 傳代條件取決于所用的細(xì)胞系。 部分經(jīng)驗(yàn)法則：
對于快速生長的細(xì)胞，倍增時(shí)間為16小時(shí)(如HEK-293)，按1：10的比例分瓶。
對于生長緩慢的細(xì)胞，倍增時(shí)間為36小時(shí)(如原代細(xì)胞)，按1：5的比例分瓶。
Ⅳ 保留凍存的細(xì)胞系，并定期解凍新細(xì)胞。 傳代次數(shù)高(>30–40)時(shí)，細(xì)胞的生長速度和形態(tài)會改變。

② 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之前，請先規(guī)劃您的實(shí)驗(yàn)。
務(wù)必要熟悉實(shí)驗(yàn)方案、確定所需的材料量，并在開始實(shí)驗(yàn)前確認(rèn)所需的一切物品條件均已齊備。
Ⅰ 開始前，設(shè)計(jì)好鋪板路線圖，標(biāo)注好每次處理或?qū)嶒?yàn)條件。
Ⅱ 計(jì)算所需脂質(zhì)體和DNA的儲備量，并確認(rèn)有足夠的下列材料：TransfectGRO減血清培養(yǎng)基(Corning 40-300-CVR)，Lipofectamine® 2000 或Lipofectamine® LTX試劑，以及DNA (0.5–1 µg/µL)。

③ 轉(zhuǎn)染時(shí)，請使用DNA。
Ⅰ 使用無內(nèi)毒素的試劑盒和實(shí)驗(yàn)方案制備DNA。
Ⅱ 通過測量OD 260/280值來確定DNA純度，測得的OD值應(yīng)介于1.7–1.9]之間。數(shù)值過高或過低均說明有雜質(zhì)，腫瘤細(xì)胞不宜用于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。
Ⅲ 在無DNA/RNA酶的水或TE中稀釋DNA。
Ⅳ 制備的工作濃度為0.5–1 µg/µL。 可用SpeedVac®濃縮儀或透析過濾裝置(例如，Millipore Amicon®超濾管)來濃縮DNA。
200mg    氨馬尿酸標(biāo)準(zhǔn)品    61-78-9    Aminohippuric Acid    氨馬尿酸標(biāo)準(zhǔn)品
200mg    氨魯米特標(biāo)準(zhǔn)品    125-84-8    Aminoglutethimide    氨魯米特標(biāo)準(zhǔn)品
200mg    氨甲環(huán)酸標(biāo)準(zhǔn)品    1197-18-8     Tranexamic Acid     氨甲環(huán)酸標(biāo)準(zhǔn)品
200mg    氨基己酸標(biāo)準(zhǔn)品    60-32-2    Aminocaproic Acid    氨基己酸標(biāo)準(zhǔn)品
200mg    氨芐青霉素三水酸標(biāo)準(zhǔn)品    7177-48-2    Ampicillin Trihydrate    氨芐青霉素三水酸標(biāo)準(zhǔn)品
200mg    氨芐青霉素標(biāo)準(zhǔn)品    69-53-4    Ampicillin    氨芐青霉素標(biāo)準(zhǔn)品
200mg    氨苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品    555-06-6    Aminobenzoate Sodium    氨苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品
200mg    氨苯甲酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品    138-84-1    Aminobenzoate Potassium    氨苯甲酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品
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