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產(chǎn)品名稱：丙酮酸脫氫酶（PDH)測(cè)試盒品牌

規(guī)格 : 50管/48樣、100管/96樣

測(cè)試方法:微量法、可見分光光度法

貨號(hào)：YS-01S6449

測(cè)定意義

PDH（EC 4.1.1.1）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶，催化丙酮酸脫梭生成乙基-TPP，把糖酵解和三羧酸循環(huán)連接起來。

測(cè)定原理

PDH催化丙酮酸脫氫，同時(shí)還原WST-8產(chǎn)生黃色物質(zhì)，從而導(dǎo)致450nm光吸收的增加。

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

樣品制備：

1）. 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品，體積可達(dá)2.000ml。

2）. 過濾混濁溶液。

3）. 除去樣品中的CO 2 。

4 ）. 加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。

5 ）. 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0，孵育約15分鐘。

6 ）. 用空白樣品做對(duì)照測(cè)定有色樣品（如有必要調(diào)整PH值至8.0）。

7 ）. 用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。

8 ）. 壓碎、攪勻固體或半固體樣品，用水溶解提取。

9 ）. 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。

10）.含脂肪的樣品用熱水提取。

特點(diǎn):

(1)應(yīng)用廣泛

由于各種各樣的無機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測(cè)定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。

(2)靈敏度高

由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展,從而對(duì)元素測(cè)定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對(duì)于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致*是比較高的。不但在實(shí)際工作中光度法被廣泛采用,在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法。

(3)選擇性好

目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測(cè)定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測(cè)定,已有比較滿意的方法了。

(4)準(zhǔn)確度高

對(duì)于一般的分光光度法來說,其濃度測(cè)量的相對(duì)誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測(cè)量,則誤差往往可減少到千分之幾。

(5)適用濃度范圍廣

可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。

(6)分析成本低、操作簡(jiǎn)便、快速

FGF4/HSTF1/HBGF-4(Fibroblast Growth Factor4) 纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子4抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

腦鈉素/利鈉肽抗體 Anti-BNP 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-E2F1 (Ser332) 磷酸化轉(zhuǎn)錄因子E2F-1抗體 規(guī)格 0.1ml

纖維素膜(30cm×3m 0.45um) 1卷 Whatman

ZNF281 英文名稱： 鋅指蛋白281抗體 0.2ml

DEF6/IBP 英文名稱： 干擾素調(diào)節(jié)因子4結(jié)合蛋白抗體 0.2ml

腦鈉素/利鈉肽抗體 Anti-BNP 0.1ml

Ezrin/Radixin 埃茲蛋白(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

丁酰膽堿脂酶抗體(N端) Anti-BCHENT 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-EGFR (Ser1142) 磷酸化表皮生長(zhǎng)因子受體抗體 規(guī)格 0.1ml

馬血清 100ml Gibco

ZNF772 英文名稱： 鋅指蛋白772抗體 0.2ml

DOK1 英文名稱： D酪酸激酶衰減蛋白1抗體 0.1ml

丁酰膽堿脂酶抗體(N端) Anti-BCHENT 0.1ml

ZBTB12 英文名稱： 鋅指蛋白ZBTB12抗體 0.2ml

phospho-Dishevelled 2 (Thr224) 英文名稱： 磷酸化蓬亂蛋白2抗體 0.1ml

水通道蛋白-1抗體 Anti-AQP1 0.1ml

Anti-CEA/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體(包被)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-ELk1(Thr417) 磷酸化細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體 規(guī)格 0.1ml

E2F4 轉(zhuǎn)錄因子E2F-4抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
丙酮酸脫氫酶（PDH)測(cè)試盒品牌硫酸鋁十二水(>99%,BR)洛伐他汀高分子蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣

鋁粉(>99%,BR)芒柄花黃素等電聚焦蛋白電泳（IEF）2倍上樣緩沖液

丁卡那霉素?zé)o水?dāng)M人參皂苷F11等電聚焦蛋白電泳（IEF）10倍陽(yáng)電泳緩沖液

氨茶堿(>98%,BR)人參皂苷Rb1等電聚焦蛋白電泳（IEF）10倍陰電泳緩沖液

酸銨三水(>99%,BR)人參皂苷Rb2等電聚焦蛋白電泳（IEF）10倍染色溶液

檸檬酸鉍銨人參皂苷Rb3等電聚焦蛋白電泳（IEF）10倍祛色溶液

硫酸氫銨(>98%,BR)人參皂苷Rg1等電聚焦蛋白電泳（IEF）標(biāo)準(zhǔn)補(bǔ)水緩沖液

溴化銨(>99%,BR)人參皂苷Rg2等電聚焦蛋白電泳（IEF）強(qiáng)化補(bǔ)水緩沖液
操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。