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如何分析嚙齒動物嗅覺的不同特征

閱讀:1192      發(fā)布時(shí)間:2023-3-17
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在荷蘭格羅寧根大學(xué)的Martien Kas實(shí)驗(yàn)室工作貝蒂·霍尼克斯(Betty Hornix,通過這篇文章向大家非常詳細(xì)地描述了如何使用動物運(yùn)動軌跡跟蹤系統(tǒng)EthoVision XT進(jìn)行視頻跟蹤設(shè)置并執(zhí)行小鼠嗅覺測試。

嗅覺和行為

人與動物之間的相互作用取決于適當(dāng)?shù)男嵊X處理,當(dāng)這個(gè)過程出現(xiàn)問題時(shí),可能會影響正常的社交行為(Hornix等人,2018)。

正確分析嗅覺對于準(zhǔn)確解釋小鼠各種行為至關(guān)重要,尤其是觀察社交行為。下面我們將描述如何進(jìn)行嗅覺習(xí)慣/嗅覺習(xí)慣測試。我們將解釋如何DIY自己的測試籠,哪些準(zhǔn)備工作是必要的,如何執(zhí)行測試,以及如何使用動物運(yùn)動軌跡跟蹤系統(tǒng)EthoVision XT分析視頻。

圖3.png


嗅覺習(xí)慣測試

嗅覺習(xí)慣/嗅覺習(xí)慣測試(OHDT)評估動物是否能夠檢測和區(qū)分不同的氣味。它由不同氣味的連續(xù)呈現(xiàn)組成。我們使用了一系列的水、兩種非社會性氣味和兩種社會性氣味。

每種氣味在持續(xù)2分鐘的三次連續(xù)試驗(yàn)中呈現(xiàn)給動物(見以下時(shí)間表)。在這三次試驗(yàn)中,氣味的嗅覺調(diào)查減少被定義為習(xí)慣化。當(dāng)出現(xiàn)一種新的氣味時(shí),動物發(fā)現(xiàn)嗅覺增加時(shí),會表現(xiàn)出一種被稱為去嗅覺習(xí)慣的整體行為。

最少的試驗(yàn)操作

這里描述的方法,即嗅覺習(xí)慣/去嗅覺習(xí)慣測試,因?yàn)榛\子內(nèi)部不受干擾,所以涉及較少試驗(yàn)操作(Yang&Crawley2009Oumadi等人,2019)。由于氣味刺激物(500 ul試管內(nèi)的用棉花密封)不會接觸籠子或籠子蓋的任何部分,因此避免了交叉試驗(yàn)污染。


如何制作自己的測試籠

該測試可以在需要進(jìn)行一些小調(diào)整的普通家庭籠中執(zhí)行。每天測試的每只動物都使用一個(gè)單獨(dú)的籠子,可以避免氣味留在籠子里。

我們在籠子的短邊燒了一個(gè)洞,用一個(gè)釘子在小錫罐上打了個(gè)洞。小錫罐用熱膠粘在每個(gè)籠子燒過的洞里(見下圖)。我們建議不要使用硅膠膠,因?yàn)闅馕逗苤?,希望盡量減少分散注意力的氣味。

氣味將通過這個(gè)錫罐呈現(xiàn)給動物。這樣,在測試過程中,保持籠子內(nèi)部不會受到干擾。

測試前的必要準(zhǔn)備

測試連續(xù)兩天進(jìn)行。第一天,動物適應(yīng)了籠子,并準(zhǔn)備好了氣味管。此外,清潔籠子,并填充了小墊層。我們使用了一種非常溫和的清潔劑來減少籠子里的氣味。

適應(yīng)和測試

動物適應(yīng)試驗(yàn)籠

我們使用了500 ul的試管,通過錫罐向動物呈現(xiàn)氣味。每只動物需要準(zhǔn)備17根管子,管子的一端切掉(見下圖)。其中兩個(gè)試管中充滿了干棉簽。在準(zhǔn)備測試和執(zhí)行的每一步中都必須戴手套,盡可能防止氣味轉(zhuǎn)移。

下午,每只動物都要適應(yīng)測試籠30分鐘,同時(shí)將一根帶有干棉簽的管子插入錫罐中。


嗅覺刺激的準(zhǔn)備

測試當(dāng)天上午,氣味管準(zhǔn)備就緒。我們使用了水、杏仁提取物、橙子提取物、幼年糞便、成年糞便。之所以選擇杏仁和橙子提取物,是因?yàn)樗鼈儦馕斗?span style="font-family: 宋體; font-size: 16px; color: rgb(0, 0, 0);">常特別,但氣味中性。

我們按照測試的順序(蒸餾水>杏仁(1:15>橙子(1:5>社會氣味1>社會氣味2)在水中和試管中準(zhǔn)備稀釋液,在不同氣味之間記得更換手套,不要觸摸棉簽的棉端(見上圖)。不要混合氣味是非常重要的!這是一項(xiàng)非常耗時(shí)的任務(wù),所以要花足夠的時(shí)間來準(zhǔn)備一切。

執(zhí)行測試

該測試總共需要49分鐘,包括在開始時(shí)用一根新管握住一根干棉簽進(jìn)行5分鐘的馴化。氣味一次出現(xiàn)3次,每次持續(xù)2分鐘,ITI1分鐘,總共15次試驗(yàn)(見上述時(shí)間表)。我們使用多視頻錄制軟件Media Recorder從測試臺上方錄制視頻。

動物可以自由探索試驗(yàn)籠。在準(zhǔn)備氣味時(shí)以及在動物變化之間需要非常小心(通過不斷更換手套),以避免轉(zhuǎn)移和混合氣味。

多只動物可以在它們自己的測試籠中同時(shí)進(jìn)行測試,只要注意準(zhǔn)確呈現(xiàn)氣味的時(shí)間,以便使用EthoVision XT 16成功進(jìn)行自動分析。

使用動物運(yùn)動軌跡跟蹤系統(tǒng)EthoVision XT分析視頻

動物運(yùn)動軌跡跟蹤系統(tǒng)EthoVision XT中,當(dāng)動物的鼻尖位于我們在3.5厘米錫罐周圍數(shù)字標(biāo)記的區(qū)域內(nèi)時(shí),我們測量了嗅氣味所花費(fèi)的時(shí)間。

數(shù)據(jù)的提取和可視化

數(shù)據(jù)以1分鐘的時(shí)間段導(dǎo)出,并將每次試驗(yàn)的2分鐘持續(xù)時(shí)間相加。我們通過繪制15次試驗(yàn)中嗅氣味的時(shí)間來可視化結(jié)果。在這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中,習(xí)慣和去習(xí)慣對非社會性氣味和第一種社會性氣味都非常有效。這是顯而易見的,因?yàn)樵?/span>3次試驗(yàn)中,每種氣味的嗅聞時(shí)間都有所減少。

此外,當(dāng)氣味變?yōu)樾職馕稌r(shí),嗅聞時(shí)間會增加。此外,這些動物能夠以類似的方式區(qū)分第一種社交氣味和最后一種非社交氣味。他們更難區(qū)分這兩種社交氣味。我們建議使用特別的社交氣味,例如不同品種或更大年齡差異的氣味。


嗅覺的有效測試和自動化

總之,嗅覺習(xí)慣/去嗅覺習(xí)慣測試對于測試嗅覺功能和分離嗅覺行為中的不同特征非常有效。此外,這種方法使動物在測試過程中不受干擾,減少了動物壓力,使用動物運(yùn)動軌跡跟蹤系統(tǒng)EthoVision XT自動化分析成為可能。



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