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如何檢查胎牛血清中的病毒

閱讀:918      發(fā)布時間:2020-11-18
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胎牛血清作為天然培養(yǎng)基被實驗室和科研單位廣泛使用,它富含細胞生長中的各種營養(yǎng)成分,但是也容易受到病毒感染,從而給細胞培養(yǎng)帶來潛在的干擾。

在美國,胎牛血清的病毒檢查遵循著9 CFR 113.52 、9 CFR 113.53聯(lián)邦法令,并以獸藥委員會(CVMP)關于免疫性獸藥生產(chǎn)中應用牛血清的指南文件(EMEA/CVMP/743/00-Rev.2)、專li藥委員會(CPMP)關于生物藥生產(chǎn)中牛血清應用指南的文件(EMEA/CPMP/BWP/1793/02)為參考,并在美國藥典(USP)中有所描述。而我國在藥典中目前只有有關新生牛血清的質檢規(guī)定,還沒有胎牛血清的內(nèi)容。

USP提到病毒檢查中,建議使用兩種或兩種以上的細胞系作為檢測細胞,其中一種細胞系應為牛源。檢測時,添加15%的待測牛血清培養(yǎng)細胞至少21天,期間細胞至少傳代兩次。之后觀察是否存在病毒的擴增。如用顯微鏡觀察是否存在細胞病變效應(例如由牛鼻支氣管炎病毒導致)、細胞染色和鏡下包涵體檢查、血吸附檢查((牛副流感3型病毒),并在此基礎上進行針對如下病毒的特異性的免疫熒光抗體檢查:

牛病毒性腹瀉病毒(BVDV

牛細小病毒

牛腺病毒

牛蘭舌病毒

牛呼吸道合胞病毒

呼腸弧病毒

狂犬病病毒

病毒還可以在電鏡下觀察,更直觀,更全面。但電鏡需要相應的儀器,樣本也需要一定的制備過程。

chang用的病毒檢查方法還是免疫檢查(這個特異性gao)、血吸附檢查和細胞病變效應。后兩個檢查是通用的病毒檢查,不具有病毒特異性,且二者可以互補。一些病毒為血吸附病毒,含有血凝素(HA),可以引起紅細胞的聚集;另外一些病毒則可造成細胞變性,引起受染細胞發(fā)生聚集、脫落、融合,形成包涵體,甚至損傷、死亡。這些恃征性的改變,稱為細胞病變效應,它可在低倍顯微鏡下直接觀察。

許多胎牛血清在質控證書上都會注明檢查的病毒種類和結果。如Ausbian®特級胎牛血清在COA即會注明廠家開展的這些檢測。

 

總之,確定牛血清沒有病毒感染,無論對于細胞培養(yǎng),還是疫苗生產(chǎn),都具有非常重要的意義。

 

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