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北京締一生物科技有限公司

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支原體qPCR檢測的結果詮釋

閱讀:1341      發(fā)布時間:2020-11-27
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支原體qPCR檢測不僅用于細胞培養(yǎng)的支原體篩查,也用于生物制品行業(yè)的放行檢測,但前提是要有方法驗證。

無論是否遵循藥典,支原體qPCR檢測的結果判定都需要一定的標準。下面小編結合德國MB廠家的支原體qPCR說明書及相關文件,給予進一步的闡釋。下面小編結合德國MB廠家的支原體qPCR說明書及相關文件,給予進一步的闡釋。

一、熒光檢測通道的結果詮釋

MB公司的qPCR試劑盒檢測時,qPCR儀的FAM通道檢測支原體熒光信號,HEX通道檢測內控對照(簡稱IC)的熒光信號(如沒有HEX通道,可用VIC通道)。IC是用于監(jiān)測qPCR反應是否正常。對于這兩個通道,Ct40為陽性結果。Ct40為陰性結果。支原體DNAIC存在信號的競爭性抑制。

在陰性對照和陽性對照均結果正常的前提下,

根據(jù)FAMTM通道和HEX通道的檢測結果,可判別樣品是否有支原體污染。

具體見下表:

1. FAM™通道 (支原體) HEX™ (IC) 通道的結果詮釋

需要說明的是:

內控對照可在支原體DNA抽提時加入。如果結果無效,則說明抽提失敗,或者qPCR存在抑制。

如果內控對照是在qPCR反應時加入,則說明qPCR存在抑制。

二、對照與樣品的結果詮釋(適用于符合EP/JP的檢測

對于遵循EP/JP的檢測,具體數(shù)據(jù)詮釋見表2。

2.

2結果判定的前提是:qPCR檢測試劑盒符合EP/JP的要求。

三、MB公司支原體qPCR應選擇質量較好,符合藥典要求的試劑盒,如德國MB公司的支原體qPCR檢測試劑盒(經典法)(英文名:Venor®Gem qEP)經過廠家全面的方法驗證,符合歐洲藥典/日本藥典要求,

適合細胞治療,CAR-T,抗體藥、疫苗等臨床項目申報和質檢。

 

需注意樣本要先做DNA抽提,再進行qPCR檢測。

MB還提供用于PCR/qPCR方法驗證的配套的支原體10CFU、100CFU菌株標準品、特異性驗證用支原體基因組DNA和細菌基因組DNA、支原體DNA定量標準品(基因組拷貝數(shù)經嚴格標定)。

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