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支原體qPCR檢測的結(jié)果詮釋

閱讀:1342      發(fā)布時(shí)間:2020-11-27
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支原體qPCR檢測不僅用于細(xì)胞培養(yǎng)的支原體篩查,也用于生物制品行業(yè)的放行檢測,但前提是要有方法驗(yàn)證。

無論是否遵循藥典,支原體qPCR檢測的結(jié)果判定都需要一定的標(biāo)準(zhǔn)。下面小編結(jié)合德國MB廠家的支原體qPCR說明書及相關(guān)文件,給予進(jìn)一步的闡釋。下面小編結(jié)合德國MB廠家的支原體qPCR說明書及相關(guān)文件,給予進(jìn)一步的闡釋。

一、熒光檢測通道的結(jié)果詮釋

MB公司的qPCR試劑盒檢測時(shí),qPCR儀的FAM通道檢測支原體熒光信號(hào),HEX通道檢測內(nèi)控對照(簡稱IC)的熒光信號(hào)(如沒有HEX通道,可用VIC通道)。IC是用于監(jiān)測qPCR反應(yīng)是否正常。對于這兩個(gè)通道,Ct40為陽性結(jié)果。Ct40為陰性結(jié)果。支原體DNAIC存在信號(hào)的競爭性抑制。

在陰性對照和陽性對照均結(jié)果正常的前提下,

根據(jù)FAMTM通道和HEX通道的檢測結(jié)果,可判別樣品是否有支原體污染。

具體見下表:

1. FAM™通道 (支原體) HEX™ (IC) 通道的結(jié)果詮釋

需要說明的是:

內(nèi)控對照可在支原體DNA抽提時(shí)加入。如果結(jié)果無效,則說明抽提失敗,或者qPCR存在抑制。

如果內(nèi)控對照是在qPCR反應(yīng)時(shí)加入,則說明qPCR存在抑制。

二、對照與樣品的結(jié)果詮釋(適用于符合EP/JP的檢測

對于遵循EP/JP的檢測,具體數(shù)據(jù)詮釋見表2

2.

2結(jié)果判定的前提是:qPCR檢測試劑盒符合EP/JP的要求。

三、MB公司支原體qPCR應(yīng)選擇質(zhì)量較好,符合藥典要求的試劑盒,如德國MB公司的支原體qPCR檢測試劑盒(經(jīng)典法)(英文名:Venor®Gem qEP)經(jīng)過廠家全面的方法驗(yàn)證,符合歐洲藥典/日本藥典要求,

適合細(xì)胞治療,CAR-T,抗體藥、疫苗等臨床項(xiàng)目申報(bào)和質(zhì)檢。

 

需注意樣本要先做DNA抽提,再進(jìn)行qPCR檢測。

MB還提供用于PCR/qPCR方法驗(yàn)證的配套的支原體10CFU100CFU菌株標(biāo)準(zhǔn)品、特異性驗(yàn)證用支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA、支原體DNA定量標(biāo)準(zhǔn)品(基因組拷貝數(shù)經(jīng)嚴(yán)格標(biāo)定)。

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