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CRISPR基因激活技術(shù),有力揭示干細(xì)胞分化過程中的關(guān)鍵機(jī)理

閱讀:886      發(fā)布時(shí)間:2020-12-9
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日前,來自杜克大學(xué)等機(jī)構(gòu)的科學(xué)家,開發(fā)了一種新方法能將干細(xì)胞轉(zhuǎn)化成為想要的細(xì)胞類型。這篇論文名為“Master Regulators and Cofactors of Human Neuronal Cell Fate Specification Identified by CRISPR Gene Activation Screens”,刊登在Cell Reports上。

利用CRISPR基因編輯技術(shù),研究人員識(shí)別出哪些轉(zhuǎn)錄因子,可用于制造成熟的成體神經(jīng)元。其實(shí)早在2016年,研究者Black等人就報(bào)道了一種方法,用以 CRISPR為基礎(chǔ)的基因激活子來開啟基因網(wǎng)絡(luò)的表達(dá),從而將成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化成為神經(jīng)元細(xì)胞。

研究人員先從多能干細(xì)胞開始,對(duì)其進(jìn)行工程化修飾,一旦變?yōu)樯窠?jīng)元細(xì)胞,就會(huì)發(fā)出紅色熒光。熒光越亮,分化為神經(jīng)元的命運(yùn)就越強(qiáng)。

隨后研究人員制備出一個(gè)導(dǎo)向RNA文庫,這些RNA針對(duì)的是所有轉(zhuǎn)錄因子的基因。研究人員向干細(xì)胞中引入了CRISPR基因激活劑和導(dǎo)向RNA文庫以便每一種細(xì)胞僅能夠接收一種單一的導(dǎo)向RNA,從而開啟特定的基因靶點(diǎn),隨后研究人員根據(jù)細(xì)胞變紅的程度進(jìn)行分類,并對(duì)紅和不紅細(xì)胞中的RNAs進(jìn)行測(cè)序,這即能揭示出哪些基因在開啟后對(duì)促進(jìn)分化為神經(jīng)元有益。研究者還揭示出拮抗干細(xì)胞分化神經(jīng)元的因子。

從干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為成熟神經(jīng)元細(xì)胞的過程需要7天時(shí)間,大大縮短了時(shí)間周期,為幫助加速治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病和開發(fā)新型檢測(cè)技術(shù),提供了很多幫助。

總之,基于CRISPR的基因激活技術(shù)對(duì)研究人類干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為具體類型細(xì)胞,提供了有力的研究工具。

 

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