傳代

 

1、貼壁細(xì)胞傳代時(shí)，先用消化液潤洗一遍；棄掉后，再加入適量消化液置于孵箱或鏡下觀察消化；當(dāng)細(xì)胞變圓，彼此之間產(chǎn)生空隙，加入等量或大量的培養(yǎng)基終止消化，培養(yǎng)基中的血清可以抑制胰蛋白酶的活性。

2、這里我沒有明確提到胰蛋白酶的濃度，并不是說濃度越高越好。胰蛋白酶底物的特異性差，會(huì)破壞細(xì)胞膜成分。PH8.0，37度環(huán)境下，消化液的消化能力是很強(qiáng)的。培養(yǎng)基中的血清會(huì)降低胰酶的消化能力，所以每次消化前，也要用PBS反復(fù)沖洗干凈培養(yǎng)皿。日常用的比較多的消化液濃度：a)0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA

b)0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA

c)0.25%胰蛋白酶

3、傳代后如果細(xì)胞不貼壁，可能的原因是胰蛋白酶消化過度或者沒有清洗干凈EDTA。

4、懸浮細(xì)胞傳代時(shí)，正常收集細(xì)胞、離心濃縮、用培養(yǎng)基重懸就可以了。懸浮細(xì)胞每次換液都需要離心重懸，但是由于懸浮細(xì)胞一般會(huì)處于單細(xì)胞層生長，有的時(shí)候生長速度很快，重懸后如果不晃動(dòng)培養(yǎng)皿，就會(huì)看到細(xì)胞成團(tuán)；如果經(jīng)常顯示懸浮細(xì)胞大量抱團(tuán)生長，也有可能是培養(yǎng)基中的血清問題、或者鈣鎂離子濃度的變化造成了細(xì)胞間的粘附力改變。

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