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Forskolin的功能與作用

閱讀:14729      發(fā)布時(shí)間:2018-4-10
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  Forskolin在不與細(xì)胞表面受體相互作用前提下刺激腺苷酸環(huán)化酶活性。在脂肪細(xì)胞中Forskolin's促進(jìn) cAMP產(chǎn)生進(jìn)而可以抑制嗜堿性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞脫顆粒作用以及組胺釋放,降低血壓、眼內(nèi)壓,抑制血小板聚集,促進(jìn)血管舒張,支氣管擴(kuò)張和甲狀腺激素分泌,刺激脂肪分解。Forskolin 抑制血小板活化因子 (PAF)的結(jié)合, 這種抑制不依賴于cAMP形成可能是 Forskolin直接作用于 PAF或者通過干擾PAF與它的受體結(jié)合實(shí)現(xiàn)的,似乎對(duì)多種膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白也有效果并且可以抑制脂肪細(xì)胞,紅細(xì)胞,血小板,和其他細(xì)胞中的葡萄糖運(yùn)輸。Forskolin也被用于治療青光眼
 
  Forskolin可以使膜,細(xì)胞或組織制備液中cAMP含量上升。Forskolin 不僅可以活化AC 而且可以與某些其它蛋白相互作用,包括葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和離子通道。Forskolin能夠促進(jìn)9種不同獨(dú)立AC形式的活化,雖然對(duì)AC9效率有點(diǎn)低,這可以用于提供一種鑒定和量化G蛋白 (Gs)–AC復(fù)合物高親和性結(jié)合位點(diǎn)的方法。G蛋白偶聯(lián)受體活化G蛋白有助于細(xì)胞中Forskolin刺激的cAMP 產(chǎn)生,因?yàn)?G蛋白-Forskolin對(duì)AC活性有增強(qiáng)作用。
 
  Forskolin的細(xì)胞內(nèi)濃度由兩個(gè)細(xì)胞膜上的酶調(diào)節(jié),促進(jìn) ATP 合成 cAMP, 而磷酸二酯酶把 cAMP 降解成 AMP。cAMP 的激活是由不同的 GTP 結(jié)合蛋白偶聯(lián)受體受體(GPCR)和 GTP 結(jié)合蛋白(Gs 或者 Gi)相互 作用而調(diào)節(jié)。蛋白是由 Gα (i 或者 s) 、Gβ 和 Gr 組成的異源三聚體GPCR 激動(dòng)劑使 GTP 和 Gα 結(jié)合,產(chǎn)生構(gòu)象變化,導(dǎo)致 Gα 與 Gβ γ 分離.分離后,Gα s 主要與 AC 激活有關(guān),而 G α i 則是抑制 AC 活性。測(cè)量胞內(nèi) cAMP 是檢測(cè)化合物對(duì) GPCR 介導(dǎo)的 AC 活性的激活或者抑 制作用的理想方法。細(xì)胞制備,細(xì)胞長到 70%的時(shí)候, 用不含鈣和鎂離子的 PBS 洗一次, 然后用 5mM EDTA(PBS 配制成的)37 度消化 5min,275g 離心 10min.HBSS 1X 重懸,計(jì)數(shù),275g 離心 5min.用 stimulation buffer 重懸細(xì)胞,按 6*105 個(gè)/ml 的濃度稀釋細(xì)胞(3000/孔) 分析步驟 1 Gα s 受體分析 cAMP 標(biāo)曲 Gα i 受體分析 cAMP 標(biāo)曲 目的 確定 cAMP 分析的敏感性 (IC50 值)和動(dòng)態(tài)范圍 (IC10-IC90) 。確定zui大分析窗的*細(xì)胞 濃度,對(duì)于 Gα i 分析,確定 Forskolin 的 EC90 以用于激動(dòng) 劑分析。
 

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