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6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH） 樣本的前處理
閱讀：520 發(fā)布時間：2021-7-76-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH） 樣本的前處理：
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
① 準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬細(xì)胞，加入1mL試劑一和10uL試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
② 將勻漿 600g，4℃離心5min。
③ 棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11100g，4℃離心10min。
④ 上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測定從線粒體泄漏的 NOX（此步可選做）。
⑤ 步驟④中的沉淀即為線粒體，加入200uL試劑二和2uL試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10秒，重復(fù)30次），用于NOX活性測定。
血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至600nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
（1）試劑四于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min。
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、200μL試劑四和40μL試劑五，混勻，記錄600nm處20s時吸光值A(chǔ)1和1min20s后的吸光值A(chǔ)2，計算ΔA=A1-A2。
NOX 活力單位的計算
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）NOX活力的計算:
單位的定義：每mL血清（漿）在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.01定義為一個酶活力單位。
NOX（U/mL）＝ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T=2500×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NOX活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變
AlbuminEgg 1g/5g/25g原裝 Sigma A5378
（卵清蛋白
(雞)）
AlcianBlue8GX 1g/5g Amresco分裝
（阿爾新藍(lán),阿利新蘭）
Alloxan 5g/10g Sigma分裝
（四氧嘧啶）
Amethopterin 10mg/25mg/100mg Sigma A6770
（氨甲喋呤）
AmidoBlack10B 5g/10g/100ml Amresco分裝
（氨基黑）
Amidoblack10B 5g/10g/25g/100g原裝 Sigma N3393
（氨基黑10B）
AmikacinSulfate 5g原裝 INALCO1758-9312
（丁胺卡那霉素）
Aminopterin 5mg/10mg/50mg Sigma A-1784
（氨基喋呤）
AmmoniumPersulfate 50g/100g Sigma分裝
（過硫酸銨）
Ammoniumsulfate 250g/500g/1kg/5kg Amresco 0191
（硫酸銨）
Ampholine PH4-6/5-7/6-9/3-9.5 國產(chǎn)
（兩性電解質(zhì)） 12ml
AmphotericinB 50mg/100mg/1g原裝 Amresco E437
(Solubilized)
（可溶性兩性霉素B）