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大鼠肝炎病毒酶聯(lián)免疫分析試劑盒技術參數(shù)

閱讀:119          發(fā)布時間:2018-4-8
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大鼠肝炎病毒酶聯(lián)免疫分析試劑盒實驗原理
    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠肝炎病毒(MHV)表達。用純化的大鼠肝炎病毒(MHV)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中肝炎病毒(MHV)相結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的肝炎病毒(MHV)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中大鼠肝炎病毒(MHV)的存在與否。
操作步驟
編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
溫育:操作同3。
洗滌:操作同5。
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
大鼠肝炎病毒酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項
1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請避光保存。
6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。
大鼠肝炎病毒酶聯(lián)免疫分析試劑盒保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月

 

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