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如果轉(zhuǎn)化細胞是屬于那種很容易消化的細胞，像RAW264.7，僅僅第二步就搞定了。就沒必要第三步第四步了。這個是需要你在實驗中能夠自己用心去體會的。建議你接受一個新細胞時把各步消化的細胞分別培養(yǎng)起來做比較，去摸索好細胞對胰酶的要求。便于你后續(xù)實驗的開展。

將細胞消化分成這幾步，除了是為了避免胰酶對細胞的損傷之外，還有一個更重要的作用就是，可以zui大程度地把細胞吹打成單個單個的狀態(tài)，不成片不連體。

因為細胞生長的時候肯定是要相互，大部分的細胞都是要成片生長的，尤其是對于貼壁細胞，單個細胞貼壁之后長著長著就長到一片去了。但是如果是成片的細胞抱團的話，傳代后細胞是不能貼壁的，這樣抱團的細胞就會死亡。所以，消化傳代的時候一定要將細胞消化成單個單個的獨立狀態(tài)，這個啊是非常考究你的功夫的！

細胞一旦脫落入懸液里你很難再將他吹打成單個，因為他沒有受力點了。很難找到受力點讓你對他吹打的力分散開細胞。所以必須要在細胞未脫落之前將其吹打開，受力點就是細胞貼壁的地方。這樣你就必須要嚴格控制好消化的程度啊，這和大師做飯掌握好火候是一樣的道理啊。既要消化到容易吹打下來，又不能太過，一吹就整片脫落，要單個單個地往下掉。所以我才要分批分次地加胰酶消化就是為了保證不同生長狀態(tài)貼壁程度的細胞能夠都維持在好的受力點分散開。這個是很重要的一點。尤其是對于某些細胞這一點就是他死的致命點。像Caco-2細胞就是如此。

另外關(guān)于傳代很重要一點就是一定不能等到轉(zhuǎn)化細胞長滿的時候才去消化傳代。要在細胞長到70%左右的時候就要傳代了，一旦發(fā)現(xiàn)細胞生長中已經(jīng)有疊層生長的時候就要立即進行消化傳代。不能再拖了。
HPLC≥98%    （R型）原人參三醇    20mg/支    Protopanaxtriol    
HPLC≥98%    雪膽素甲    20mg/支    Curcurbitacin IIa    
HPLC≥98%    雪膽素乙    20mg/支    Curcurbitacin Iib    
HPLC≥98%    蔓荊子黃素    20mg/支    vitexicarpin    
HPLC≥98%    龍血素B    20mg/支    LOUREIRIN B    
HPLC≥98%    劍葉龍血素C    20mg/支    Cochinchinenin C    
HPLC≥98%    辛夷脂素    20mg/支    demethoxyaschantin    
HPLC≥98%    烏藥醚內(nèi)脂    20mg/支    Linderane    
HPLC≥98%    漆黃素(非瑟酮/紫鉚素)    20mg/支    Fisetin  
轉(zhuǎn)化細胞