Porcupine抑制劑(LGK974)公司*的產(chǎn)品：BCHE(butyrylcholinesterase)NT 丁酰膽脂抗原(N端)二丁酯 98%
BCHE(butyrylcholinesterase)CT 丁酰膽脂抗原(C端)二二單 GR,99.0%
Nurr1 核受體相關(guān)因子-1（抗原）二二單 standard for GC
CD73 (5´-nucleotidase cytos

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：Porcupine抑制劑(LGK974)

英文名稱：LGK974

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

商品介紹：

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

灰黃青霉DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體Human MSC(Musculin) ELISA Kit人B受體相關(guān)蛋白31(BCAP31)免疫試劑盒

谷棒桿菌磷化絲裂原活化蛋白激1/2抗體Human CENPU (Centromere protein U) ELISA KIT人B生長(zhǎng)因子(BCGF)免疫試劑盒

釀酒酵母上皮粘附分子抗體Human MKL2 (MKL/myocardin-like protein 2) ELISA KIT人B淋巴瘤因子6(Bcl6)免疫試劑盒

香菇屬酪蛋白激受體B2抗體Human MOAP1 (Modulator of apoptosis 1) ELISA KIT人B淋巴瘤-XL(Bcl-xl)免疫試劑盒

少孢酵母表皮生長(zhǎng)因子抗體Human MAZ (Myc-associated zinc finger protein) ELISA KIT人B連接蛋白(BLNK)免疫試劑盒

*雞油菌都不能訂購(gòu)表皮生長(zhǎng)因子受體3抗體Human MOB2 (MOB kinase activator 2) ELISA KIT人B活化因子受體(BAFF-R)免疫試劑盒

突臍蠕孢菌酪蛋白激A4受體抗體Human MDGA1 (MAM domain-containing glycosylphosphatidylinositol anchor protein 1) ELISA KIT人B活化因子(BAFF)免疫試劑盒

雀黃鏈霉菌上皮鈣粘附分子抗體Human MPHOSPH10 (U3 small nucleolar ribonucleoprotein protein MPP10) ELISA KIT人Bκ 輕肽基因增強(qiáng)子核因子抑制因子ε(NFKBIE)免疫試劑盒

鏈格孢紅生成受體抗體Human PRX(Periaxin) ELISA Kit人B群鏈球菌多糖抗體(IgG)免疫試劑盒

克魯斯假絲酵母腦啡肽抗體Human MKX(Homeobox protein Mohawk) ELISA Kit人B-淋巴趨化因子1(BLC-1/CXCL13)免疫試劑盒

楊齒白木層孔菌EID2蛋白抗體Human MARCO (Macrophage receptor MARCO) ELISA KIT人B淋巴抗原(CD20)免疫試劑盒

大腸桿菌上皮粘附分子抗體Human  MST1R(Macrophage-stimulating protein receptor) ELISA Kit人blca-4 免疫試劑盒

淡紫擬青霉紅膜相關(guān)蛋白ERMAP抗體Human M6PR (Cation-dependent mannose-6-phosphate receptor) ELISA KIT人blca-1 免疫試劑盒

菜豆間座殼腺樣癌特異性相關(guān)抗原EMC1抗體Human SEMG1(Semenogelin-1) ELISA Kit人Bcl-2樣蛋白1(BCL2L1)免疫試劑盒

擬粉紅鎖擲孢酵母腺樣癌特異性相關(guān)抗原EMC1抗體Human MAD1L1(Mitotic arrest deficient 1-like protein 1) ELISA Kit人B7-H4 免疫試劑盒

斯氏梭菌硫軟骨蛋白多糖3抗體Human M6PR (Cation-dependent mannose-6-phosphate receptor) ELISA KIT人A組鏈球菌菌壁多糖抗體(ASP)免疫試劑盒

綠色木霉Trichoderma│viride 質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=3%華蟾酥基

熒光假單胞菌生物型FPseudomonas│fluorescens biotype F 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品木蘭脂

多噬伯克霍爾德氏菌Burkholderia│multivorans 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)異飛薊賓
Porcupine抑制劑(LGK974)土芽孢乳桿 2,4-二氟苯過(guò)氧化Elisa

pnz8149 3,5-二氟苯過(guò)氧化氫Elisa

構(gòu)巢曲霉 5-煙酸環(huán)磷酸腺苷Elisa

油菜核病 (+)-兒茶 水合物黃體生成Elisa

慢弧 1，2--d4激活A(yù)Elisa

根瘤 2-苯基乙基異硫代酸酯卵泡抑Elisa

香菇19 三乙基氫化鋰球蛋白AElisa

釀酒酵母 (S)-(+)-3-甲基-2-丁球蛋白GElisa

厚垣孢普可尼亞 2,5-二嘧啶球蛋白MElisa

淺藍(lán)灰曲霉 2--5-甲氧基嘧啶同型半胱氨酸Elisa

熱帶假絲酵母 4-溴-2-羥基苯甲褪黑Elisa

黑青霉 (S)-3,3-二甲基-2-丁褪黑受體1AElisa

華根霉 1-溴-3-(三氟甲氧基)苯褪黑受體1BElisa

根瘤 2-溴-6-氟褪黑受體1CElisa

茄腐鐮刀 4-(2-噻唑基偶氮)間苯二酚維生DElisa 

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)