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氣相色譜聯(lián)用儀為尿類固醇分析提供優(yōu)勢(shì)

閱讀:595        發(fā)布時(shí)間:2023-4-14

氣相色譜聯(lián)用儀一直是類固醇譜臨床評(píng)估的關(guān)鍵。評(píng)估了串聯(lián)質(zhì)譜法提供的測(cè)定性能改進(jìn)。在所測(cè)試的糖皮質(zhì)激素和雄激素分析物的范圍內(nèi),三重四極桿系統(tǒng)的檢測(cè)和定量限比單四極桿系統(tǒng)低約 20 倍,但更顯著的改進(jìn)是信噪比得到顯著改善,線性范圍更寬。這些好處允許更可靠和伴隨測(cè)量具有顯著不同豐度和更小體積尿液的類固醇。


腎上腺和性腺類固醇的尿代謝物分析已經(jīng)常規(guī)進(jìn)行了大約 30 年,定義了一種在全球范圍內(nèi)用于研究和臨床診斷的方法,也被擴(kuò)展到毒理學(xué)領(lǐng)域。在臨床上,這種分析已廣泛用于先天性代謝缺陷的診斷,*近還用于腎上腺腫瘤的鑒別診斷. *初,通過(guò)氣相色譜 (GC) 和火焰離子化檢測(cè)器 (FID) 等檢測(cè)器測(cè)定類固醇的甲氧基胺-三甲基甲硅烷基衍生物的概況,但*近通過(guò)單四極桿質(zhì)譜儀 (MS) 鑒定了類固醇。MS 的使用增強(qiáng)了 FID 的特異性,但挑戰(zhàn)依然存在。類固醇及其代謝物的數(shù)量在分析物和疾病狀態(tài)之間差異很大,這意味著校準(zhǔn)范圍可能會(huì)有很大差異。尤其是一些類固醇的含量較低(例如皮質(zhì)醇),并且接近可接受的定量限 (LOQ),即使在提取相對(duì)大量 (~20 mL) 的尿液之后也是如此。


使用串聯(lián)質(zhì)譜 (MS/MS) 可以改善信噪比,從而降低 LOQ。*近,液相色譜 (LC)-MS/MS 已成為定量分析的優(yōu)選方法。由于通常不需要衍生化,因此可以獲得更高的通量。盡管電離效率較差,但一些中性類固醇可以通過(guò)電噴霧 (ESI) 和大氣壓化學(xué) (APCI) 電離成功量化,盡管它們的信號(hào)容易受到基質(zhì)離子抑制的影響。盡管如此,更豐富的循環(huán)孕烯和雄烯類固醇,如皮質(zhì)醇和睪酮,現(xiàn)在通常通過(guò)這種方式進(jìn)行量化。然而,它們的代謝產(chǎn)物,其中一些保留了生物活性, 無(wú)法使用 LC-MS/MS 輕松檢測(cè)或區(qū)分。A 環(huán)中酮烯醇功能的代謝形成 5α 和 5β 還原的二氫產(chǎn)物,隨后 3-酮被 3α 和 β-羥基類固醇脫氫酶還原并產(chǎn)生離子化不佳的代謝物。此外,LC 對(duì)多組立體異構(gòu)體的分離是有問題的。

因此,GC-MS/MS 對(duì)類固醇激素具有固有的優(yōu)勢(shì),因?yàn)樗鼈兲峁┝艘幌盗薪Y(jié)構(gòu)相似的親脂性分析物。為 GC 分析形成的異構(gòu)衍生物可以更容易地分辨,促進(jìn)立體化學(xué)區(qū)分。此外,與前體激素相比,來(lái)自代謝物衍生物的信號(hào)強(qiáng)度沒有受到影響。我們通過(guò)單四極桿分析調(diào)整了基于 GC 的尿類固醇分析方法,以利用串聯(lián)質(zhì)譜的能力,并在此報(bào)告經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的測(cè)定。



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