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技術文章

熒光分光光度計的原理

閱讀:2824          發(fā)布時間:2020-9-18

熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數,從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過對這些參數的測定,不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構象變化,從而闡明分子結構與功能之間的關系。熒光分光光度計的激發(fā)波長掃描范圍一般是190~650nm,發(fā)射波長掃描范圍是200~800nm??捎糜谝后w、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描。
  熒光分光光度計的原理:
  由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍紫光經濾光片照射到樣品池中,激發(fā)樣品中的熒光物質發(fā)出熒光,熒光經過濾過和反射后,被光電倍增管所接受,然后以圖或數字的形式顯示出來。
  物質熒光的產生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài),這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出,從而產生熒光。
  不同物質由于分子結構的不同,其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征,這種特征反映在熒光上表現為各種物質都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜,因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進行物質的鑒定。
  在溶液中,當熒光物質的濃度較低時,其熒光強度與該物質的濃度通常有良好的正比關系,即IF=KC,利用這種關系可以進行熒光物質的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似,熒光分析通常也采用標準曲線法進行。

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