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上海徠同生物科技有限公司

棉花葉片的快速PCR檢測(cè)試劑盒使用方法

時(shí)間:2023-5-11閱讀:173
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試劑盒應(yīng)用

本試劑盒采用利裂解液配方,有針對(duì)性的從組織、培養(yǎng)細(xì)胞、拭子、血液、尿液、唾液、環(huán)境樣本中獲得病毒 RNA。裂解、提取和純化只需 10 分鐘。該配方中添加 RNA 保護(hù)劑,能夠抑制 RNA降解、保護(hù)RNA 完整,從而提高 RNA 產(chǎn)量。提取后的 RNA 可直接用于 RT-PCR、RT-PCR、分子克隆、文庫(kù)構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)

本試劑盒僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等域。

保存條件

室溫保存一年。

自備材料

水浴鍋或金屬浴、無(wú)水乙醇、1.5mL 無(wú) DNase 無(wú) RNase 離心管

 

使用方法

1.樣本處理方法

1.1 從動(dòng)物組織中提取

1.1.1  20-100mg 組織樣本放入液氮中充分研磨,加入 700uL 裂解液 VR,顛倒混勻?;蛘呷?/span> 20-100mg 組織樣本加入 700uL 裂解液 VR,加入1顆鋼珠,放入組織研磨器中,研磨 1-2分鐘。

1.1.2  55℃孵育 1 分鐘。12,000rpm 離心 1 分鐘。

1.1.3   500uL 上清加入 250uL 無(wú)水乙醇,充分混勻。按照步驟 2.1-2.7 進(jìn)行操作

12從中取

1.2.1 懸浮細(xì)胞 1.000rpm 離心 5 分鐘,收集細(xì)胞沉淀?;蛘哔N壁細(xì)胞用胰酶消化后 1,000rpm 離心 5 分鐘,收集細(xì)胞沉淀。1.2.2 細(xì)胞數(shù)量<5x106個(gè)時(shí),加入 500uL 裂解液 VR。細(xì)胞數(shù)量為 5x106~1x107個(gè)時(shí),加入 700uL裂解液 VR。輕輕吹打混勻,55C孵育 1 分鐘。

1.2.3 12,000rpm 離心 1 分鐘。

1.2.4 細(xì)胞數(shù)量<5x106個(gè)時(shí),取 450uL 上清。細(xì)胞數(shù)量為 5x106~1x107個(gè)時(shí),取 650uL 上清。

1.2.5 加入 0.5 倍體積無(wú)水乙醇,充分混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作。

1.3 從血液、尿液、唾液、細(xì)胞上清液中提取1.3.1 300uL 樣本中加入 500uL 解液 VR。顛倒混勻,55C孵育 1分鐘1.3.2 加入 400uL 無(wú)水乙醇,上下顛倒混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作。

1.4從子中提取

1.4.1 拭子置于 700uL 裂解液 VR 中,顛倒混勻,55°C孵育 1 分鐘。1.4.2 加入 350uL 無(wú)水乙醇,上下顛倒混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作

2.RNA 提取

2.1 全部加入 RNA 吸附柱中(如有需要可離心兩次)12,000rpm 離心 1分鐘,倒掉收集管中廢液2.2  RNA 吸附柱中加入 500uL 洗滌液 VRI,12,000rpm 離心 30 ,倒掉收集管中廢液。2.3 RNA 吸附柱中加入 500uL 洗滌液 VRII,12,000rpm 離心 30 ,倒掉收集管中廢液

2.4 重復(fù)步驟 2.3 一次。

2.5 12,000rpm 離心 2 分鐘,倒掉收集管中廢液。

2.6 RNA 吸附柱放入新 1.5mL無(wú)DNase 無(wú)RNase 離心管中加入 30-50uL 洗脫液 V,室溫放置1分鐘。2.7 12,000rpm 離心分鐘,得到 RNA 溶液,-80C保存。

 

注意事項(xiàng)

1、務(wù)必在超凈臺(tái)中進(jìn)行操作,常換手套,防止 RNA 降解。

2、盡可能使用新鮮樣本進(jìn)行 RNA 提取。

3、使用無(wú) DNase 無(wú)RNase 的吸頭和離心管,防止 RNA 降解,常更換吸頭,防止交叉污染。

4、為了提高洗脫效率,可提將洗脫液 V 置于 65°C水浴后再使用。


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