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上海徠同生物科技有限公司

掃描電鏡透射電鏡樣本制備步驟外包服務(wù)介紹

時間:2023-12-5閱讀:282
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 透射電鏡觀察細胞樣品實驗檢測 

 

一、 實驗儀器與試劑

表格一:實驗儀器

儀器

透射電子顯微鏡

超薄切片機

 

表格二:試劑

試劑

PBSpH7.4

無水乙醇

丙酮

1%

Pon812包埋套裝

酸雙氧鈾

醋酸鉛

 

二、 實驗步驟

1.  醛類固定:加入1mL 2.5%戊二醛溶液(PBS 稀釋),4度固定過夜;

2.清洗:用PBS清洗4次,每次靜置15min;

3.固定:用1%溶液 4度固定2h;

4.清洗:用PBS清洗4次,每次靜置15 min

5.脫水:用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脫水各靜置15min(70%乙醇中靜置過夜),再用100%乙醇脫水2次,每次靜置20min

6.置換:用丙酮置換2次,每次靜置15min

7.  浸漬:過程如下:

A.丙酮:包埋劑=21(體積比)的浸漬液中浸漬1h;

B.丙酮:包埋劑=12(體積比)的浸漬液中浸漬4h;

C.純包埋劑浸漬2每次24h

8. 包埋:將樣品放入盛有純包埋劑的包埋板中;

10.聚合:將包埋板置于65℃條件下各聚合48h以上;
11.修塊:將包埋頭修成梯形,且樣品表面積小于0.2mm×0.2mm;

12.超薄切片:切片厚度70nm

13.染色:醋酸雙氧鈾染色 10min后清洗;

          醋酸鉛染色 10min后清洗;

14. 上機檢測。

透射電鏡制備注意事項(細胞)

1、細胞數(shù)量: > 1*106次方;

2、消化細胞時要注意不要過度,及時用含血清的培養(yǎng)液終止消化;

3、終止消化后,預(yù)冷的PBS (pH 7.4 )洗細胞1-2次離心(1500rpm, 5min)棄上清(細胞收集在1.5mlEP管中) ;

4、加入1mL 2.5%戊二醛溶液(需用PBS配制該溶液),可用吸管輕輕吹散細胞,使細胞懸浮于固定液中;

54度固定過夜后寄出 (寄送時加冰袋,并用2.5%戊二醛溶液將EP管中剩余空間充滿)

 

腎臟組織樣本制備步驟:

1、迅速取材;2PBS漂洗2次,切成小塊(米粒大?。?;3、快速放入2.5%戊二醛固定液中,4度固定過夜;4、固定液將整個容器里面的空間都充滿,封口膜封口;5、多加冰袋運輸。



我司擁有成熟的技術(shù)團隊和科學(xué)的管理規(guī)范,實驗流程均嚴格按照SOP操作,公司擁有的各類的儀器設(shè)備為各類服務(wù)的順利開展及質(zhì)量提供有力的支撐。公司已經(jīng)建立起多個實驗平臺,包括細胞培養(yǎng)、克隆構(gòu)建、病毒包裝、組織分析、分子檢測等。


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