Zeta Life公司Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞流程

用試劑轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞怎樣提高轉(zhuǎn)染效率一直是困擾實(shí)驗(yàn)者的一道難題，特別對(duì)于10000左右質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染更是困難；我們實(shí)驗(yàn)室總結(jié)了用Zeta Life公司Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑貨號(hào)AD600025轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞一套優(yōu)化方案希望對(duì)大家轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞提高轉(zhuǎn)染效率有一定的幫助。

下圖是8000bp左右的pEGFP-C1在6孔板用Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞的熒光和細(xì)胞明場(chǎng)圖片。

提高轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞條件如下

一、質(zhì)粒DNA準(zhǔn)備

1、質(zhì)粒DNA濃度700ng/ul（注意：①溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水；②無(wú)內(nèi)毒素），我用QIAGEN試劑盒除去的內(nèi)毒素

二、操作流程

1、先將細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)板，細(xì)胞匯合度在70%左右，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

2、復(fù)合物制備：將質(zhì)粒DNA與Zeta Life Advanced Transfection Reagent貨號(hào)AD600025轉(zhuǎn)染試劑按照1:1（12ug:12ul）關(guān)系直接混合，用移液器吹吸10-15次混勻，室溫靜止10-15分鐘。

3、將復(fù)合物加入wan全培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)板，并輕輕混勻，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)（不建議把復(fù)合物加入到無(wú)血清的培養(yǎng)基里面，我后期會(huì)進(jìn)一步摸索此條件）。

4、轉(zhuǎn)染24小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液。

5、質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率

三、注意事項(xiàng)：

1本轉(zhuǎn)染方法不適用在下面轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染如：lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等；

2細(xì)胞培養(yǎng)基：Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清，Gibco公司DMEM;

四、美國(guó)Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑信息：

五、RAW 264.7細(xì)胞簡(jiǎn)述：

RAW 264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞. 此細(xì)胞株源自雄性Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤。 sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細(xì)胞株不分泌可檢測(cè)到的病毒顆粒，XC斑點(diǎn)形成試驗(yàn)陰性。 可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。 可以抗體依賴(lài)性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。