Fastin™ Elastin Assay (Biocolor F2000) 彈性蛋白檢測(cè)技術(shù)指南

——精準(zhǔn)定量組織與細(xì)胞外基質(zhì)中彈性蛋白的黃金標(biāo)準(zhǔn)

一、檢測(cè)原理與產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

1.1 特異性結(jié)合機(jī)制

五肽重復(fù)序列靶向：

染料特異性結(jié)合彈性蛋白特征性 GXXPG 結(jié)構(gòu)域（X為疏水氨基酸）

不識(shí)別膠原或纖維連接蛋白（交叉反應(yīng)＜0.1%）

比色法檢測(cè)：

形成紫紅色復(fù)合物（λmax=513nm），動(dòng)態(tài)范圍 0.2-50 μg

1.2 性能參數(shù)對(duì)比

參數(shù)Fastin™ F2000傳統(tǒng)ELISA法組織化學(xué)染色

檢測(cè)時(shí)間1.5小時(shí)4-6小時(shí)定性分析

靈敏度0.1 μg1 μgN/A

樣本需求量10 mg組織50 mg組織5 μm切片

數(shù)據(jù)輸出定量（μg/mg）半定量圖像分析

1.3 適用樣本類型

推薦樣本：

? 皮膚/血管/肺組織勻漿

? 細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）提取物

? 疾病模型（如動(dòng)脈粥樣硬化斑塊）

二、標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)流程

2.1 樣本前處理

組織裂解方案：

復(fù)制

1. 液氮研磨至粉末狀

2. 加入0.25M草酸銨（試劑盒提供），95℃加熱2小時(shí)

3. 12,000g離心10分鐘，取上清檢測(cè)

細(xì)胞ECM提?。?/p>

用含 10mM EDTA 的PBS輕柔刮取培養(yǎng)皿底層

2.2 檢測(cè)步驟

復(fù)制

1. 標(biāo)準(zhǔn)品制備：0, 2, 5, 10, 20, 50 μg/mL梯度

2. 樣本/標(biāo)準(zhǔn)品各100 μL + 染料試劑50 μL

3. 37℃振蕩孵育90分鐘（避光）

4. 離心沉淀復(fù)合物，去上清

5. 染料釋放劑500 μL重懸，測(cè)OD513nm

三、數(shù)據(jù)解讀與優(yōu)化

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線示例

彈性蛋白(μg)OD513nm（均值）

00.012

50.305

100.642

201.218

擬合方程：y=0.061x + 0.015（R2=0.998）

3.2 質(zhì)量控標(biāo)準(zhǔn)

空白值：OD513nm＜0.05

重復(fù)性：批內(nèi)CV＜8%（n=3）

3.3 問(wèn)題排查指南

現(xiàn)象可能原因優(yōu)化方案

標(biāo)準(zhǔn)曲線線性差染料未充分溶解37℃預(yù)熱試劑10分鐘

樣本值超出范圍延長(zhǎng)加熱至3小時(shí)

背景值高增加離心至15,000g

四、技術(shù)問(wèn)答（Q&A）

Q1：能否檢測(cè)彈性蛋白降解產(chǎn)物？

需改用 Fastin™ Elastin Degradation Kit（Cat. F2200）檢測(cè)可溶性片段

Q2：與天狼星紅染色的相關(guān)性？

定量結(jié)果與 Verhoeff染色 顯著相關(guān)（r=0.91, p＜0.001），但與天狼星紅無(wú)直接可比性