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人正常膀胱上皮細(xì)胞 SV-HUC-1 說(shuō)明書(shū)

閱讀:2763        發(fā)布時(shí)間:2019/10/8
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人正常膀胱上皮細(xì)胞(SV-HUC-1)

 

細(xì)胞介紹

 

這株細(xì)胞是正常輸尿管組織用SV40病毒轉(zhuǎn)染建株的。反復(fù)用非洲綠猴腎細(xì)胞平 板測(cè)試檢測(cè)傳染性SV40的生成,結(jié)果都呈陰性。

 

細(xì)胞特性

 

1)來(lái)源:膀胱

2)形態(tài):上皮細(xì)胞

3)含量:>lxl06 個(gè)/mL

4)污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5)規(guī)格:T25瓶或者lmL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存:使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后, 可在1000RPM,常溫條件下,離心5min后,于潔凈操作臺(tái)棄去上清,加入推薦 使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至l〇cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng) 狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

 

細(xì)胞用途:僅供科研使用。

 

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

 

1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

 

1.準(zhǔn)備 F-12K 培養(yǎng)基(GIBCO,21127-022),90%;胎牛血清,10%。

2.培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱 濕度為70%-80%。

3. 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

 

2)細(xì)胞處理:

 

復(fù)蘇細(xì)胞:將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍,加 入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入l〇cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢 查細(xì)胞密度。

細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

力口 2m丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37°C培

養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部 分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止 消化。

按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者

細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄 去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約lml含血清的培養(yǎng)基后 加入凍存管中,再添加1〇%DMSO后進(jìn)行凍存。

 

注意事項(xiàng):

 

收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立 即與我們聯(lián)系。

所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注 意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

瓶中。

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