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原代細(xì)胞傳代技術(shù)

閱讀:1721        發(fā)布時(shí)間:2019/10/18
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一、貼壁細(xì)胞的消化法傳代
1、吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。
2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或與EDTA混合液)輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶,使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。
3、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時(shí),棄去消化液,加入培養(yǎng)液終止消化。
4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液,分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中,置37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。

二、懸浮細(xì)胞的傳代
1、直接傳代
① 讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2-2/3。
② 用吸管吹打形成細(xì)胞懸液后,分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中,置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2、離心法傳代
① 將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),離心800-1000rpm,5分鐘。
② 去除上清,加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi),用吸管吹打使之形成細(xì)胞懸液。
③ 將細(xì)胞懸液分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中,置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

 

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