DNA是攜帶生物體遺傳信息的重要分子，它的完整性對(duì)細(xì)胞存活至關(guān)重要。然而，在生命活動(dòng)中，DNA時(shí)刻遭受著內(nèi)源性（氧化自由基、復(fù)制叉崩塌等）或外源性（電離輻射、烷化劑等）刺激，DNA損傷不可避免。

檢測(cè)DNA損傷的方法有很多，根據(jù)其原理大致可以分為3類： 基于損傷DNA理化性質(zhì)的改變檢測(cè)DNA損傷、基于分子雜交檢測(cè)DNA損傷以及基于DNA損傷后形成的產(chǎn)物檢測(cè)DNA損傷。前兩種方法是基于熒光標(biāo)記直接觀測(cè)DNA的損傷情況，而基于DNA損傷后形成的產(chǎn)物檢測(cè)DNA損傷是通過(guò)標(biāo)記物的檢測(cè)間接反映DNA的損傷程度。

※ 基于DNA損傷后形成產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)

DNA損傷過(guò)程中可形成某些特定的損傷產(chǎn)物，可通過(guò)檢測(cè)損傷產(chǎn)物（磷酸化H2AX、8-OHdG等）來(lái)評(píng)估DNA損傷。也可標(biāo)記損傷DNA，如末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧尿苷三磷酸標(biāo)記（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL），通過(guò)標(biāo)記物的檢測(cè)間接反映DNA的損傷程度。

1.雙鏈斷裂標(biāo)志物磷酸化H2AX檢測(cè)法 H2AX是組蛋白H2A家族成員之一，包含一個(gè)進(jìn)化保守區(qū)域SQ位于真核細(xì)胞的C末端，分子量為14KD，139位有個(gè)絲氨酸殘基，在細(xì)胞發(fā)生DNA雙鏈斷裂后的數(shù)分鐘內(nèi)，將會(huì)被ATM,ATR和PRKDC磷酸化，形成γH2AX，進(jìn)而迅速招募DNA修復(fù)蛋白和凋亡蛋白到損傷部位，每個(gè)雙鏈的斷裂區(qū)會(huì)有成百上千的γ-H2AX，然后在1h左右數(shù)量和密度達(dá)到峰值。由于γH2AX的出現(xiàn)與DNA雙鏈斷裂緊密關(guān)聯(lián)，是目前國(guó)內(nèi)外研究細(xì)胞DNA雙鏈斷裂應(yīng)激反應(yīng)的熱點(diǎn)之一，同時(shí)也可以作為DNA雙鏈斷裂的標(biāo)志物。

由于與DNA雙鏈斷裂緊密相關(guān)，γH2AX可以作為雙鏈修復(fù)的標(biāo)志物 1.原位DNA損傷分析試劑盒（96次分析），P-6001-096 2.H2AFX 多克隆抗體，PAB8764 3.8-OHdG DNA損傷定量直接分析試劑盒（比色法）（48次分析），P-6003-48

DNA斷片標(biāo)記法 原位末端標(biāo)記法（TdT-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL）是一種檢測(cè)凋亡細(xì)胞DNA鏈斷裂片段的方法。細(xì)胞凋亡發(fā)生時(shí)，內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶將DNA降解成片段，在脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶的作用下，底物dUTP 或BrDU(無(wú)或有熒光標(biāo)記)可連接到DNA斷片的3-OH末端，采用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀對(duì)標(biāo)記物進(jìn)行分析，實(shí)現(xiàn)在單細(xì)胞水平檢測(cè)凋亡細(xì)胞的DNA碎片。

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