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當(dāng)前位置:武漢艾美捷科技有限公司>>技術(shù)文章>>ChIP的高效替代方案, Epigentek CUT&RUN技術(shù)
CUT&RUN(Cleavage Under Targets and Release Using Nuclease)在細(xì)胞內(nèi)利用抗體靶向定位目標(biāo)蛋白, 再由pA/G-微球菌核酸酶(Micrococcal nucleasel, MNase)對目標(biāo)蛋白兩端的DNA進(jìn)行切割,從而將目標(biāo)蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物釋放到細(xì)胞外。
作為ChIP的高效替代方案, CUT&RUN技術(shù)在蛋白質(zhì)-DNA研究中將會被越來越廣泛地使用。以下為CUT&RUN與Chip-seq對比圖:
圖:分別對K-562細(xì)胞的H3K4me3和H3K27me3所結(jié)合的DNA進(jìn)行測序,用于ChIP的細(xì)胞數(shù)量為2000萬,用于 CUT&RUN的細(xì)胞數(shù)為50萬。對測序結(jié)果進(jìn)行分析,CUT&RUN有著卓丨越的靈敏度和信噪比,測序深度減少了10倍以上,細(xì)胞的需求減少了40倍。
艾美捷 EpiGentek EpiNext CUT&RUN快速套件,以優(yōu)惠價格從低輸入提供無超聲破碎,以可靠地識別真正的目標(biāo)蛋白質(zhì)富集區(qū)域并實現(xiàn)高分辨率定位??蓾M足用戶快速富集蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA并繪制全基因組蛋白質(zhì)/DNA相互作用的圖譜的需求。
EpiNext CUT&RUN快速套件包含執(zhí)行測試所需的所有必要試劑從哺乳動物細(xì)胞或分離的細(xì)胞核/染色質(zhì)開始成功切割和運行。在反應(yīng)中,,細(xì)胞核是從細(xì)胞中分離出來的。靶蛋白DNA復(fù)合物與芯片級結(jié)合/捕獲感興趣的抗體。使用*的核酸裂解酶混合物,染色質(zhì)片段化,目標(biāo)蛋白質(zhì)/DNA復(fù)合物兩端的DNA序列劈開/移除。同時,目標(biāo)蛋白占據(jù)的DNA序列不受影響。然后純化和洗脫靶蛋白結(jié)合的DNA。富集的DNA可用于用各種方法分析蛋白質(zhì)與DNA的相互作用,特別是下一代測序。試劑盒中包括陽性對照抗體(抗H3K9me3),陰性對照非免疫IgG,和對照染色質(zhì),可用于證明試劑盒的有效性和現(xiàn)場性能PCR/生物分析儀步驟。
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