焦磷酸鹽 (PPi) 是通過(guò)許多生化反應(yīng)產(chǎn)生的，例如 ATP 水解、DNA 和 RNA 聚合、腺苷酸環(huán)化酶形成環(huán)狀 AMP 以及脂肪酸的酶促活化以形成其輔丨酶 A 酯。艾美捷 PhosphoWroks™ 焦磷酸鹽檢測(cè)試劑盒為測(cè)量焦磷酸鹽提供了可靠的分光光度法。

艾美捷熒光法焦磷酸檢測(cè)試劑盒使用專有的熒光焦磷酸鹽傳感器，其熒光強(qiáng)度與焦磷酸鹽濃度成正比。與酶偶聯(lián)焦磷酸鹽方法相比，檢測(cè)方法更容易、更可靠，后者需要至少兩種酶來(lái)檢測(cè)焦磷酸鹽。該試劑盒提供了測(cè)定焦磷酸鹽的所有基本成分。該試劑盒已成功用于高通量篩選 (HTS)。

艾美捷熒光法焦磷酸檢測(cè)試劑盒熒光酶標(biāo)儀：

勵(lì)磁 316 納米

排放 456 納米

隔斷 420 納米

推薦板 純黑色

艾美捷熒光法焦磷酸檢測(cè)試劑盒組件：

組分 A：檢測(cè)緩沖液 1 瓶（25 毫升）

組件 B：PPi 傳感器 1小瓶（凍干粉）

組分 C：焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品 1 瓶（1 毫升，50 毫米）

組分 D：二甲基亞砜 1 瓶 (200 µL)

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：

焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品

將 50 μL 的 1 mM 焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液加入 450 μL 的 ddH2O 或 50 mM Hepes 緩沖液中，以獲得 100 μM 焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液 (PS7)。取 100 μM 焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液并在 ddH2O 或 50 mM Hepes 緩沖液中進(jìn)行 1:3 連續(xù)稀釋，以獲得連續(xù)稀釋的焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液 (PS6 - PS1)。

準(zhǔn)備工作解決方案：

將 25 μL 的 200X PPi 傳感器原液加入 5 mL 的檢測(cè)緩沖液（組分 A）中，并充分混合以制成 PPi 工作溶液。

注意     由于該檢測(cè)對(duì) PPi 的高靈敏度，使用不含 PPi 的實(shí)驗(yàn)室器具和試劑非常重要。DTT ≥ 1 mM 會(huì)增加背景，MgCl 2 ≥ 2 mM 會(huì)降低響應(yīng)。

艾美捷熒光法焦磷酸檢測(cè)試劑盒示例：

圖：使用熒光酶標(biāo)儀在純黑色 96 孔板中使用 PhosphoWorks™ 熒光焦磷酸鹽檢測(cè)試劑盒測(cè)量焦磷酸鹽、ATP 和磷酸鹽劑量反應(yīng)。