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開曼生物 前列腺素 E2快速檢測ELISA試劑盒檢測原理

時間:2022/7/12閱讀:304
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前列腺素E2是多種細胞內花生四烯酸的主要代謝產物,象類花生酸一樣,不能在胞內儲存.當細胞被激活或者提供自由花生四烯酸后,PEG2才能被合成,并釋放到胞外;在體內,通過15-脫氫酶途徑,PEG2能快速轉變成為無活性的13,14-dihydro-15-keto PGE2.PEG2的半衰期為30秒,在正常血液中的含量為3-12pg/ml.

 

艾美捷 開曼生物 前列腺素E2快速檢測ELISA試劑盒檢測原理

本試驗基于PGE2PGE2-乙酰膽堿酯酶(AChE)結合物(PGE2示蹤劑)之間的競爭,以獲得*的PGE2單克隆抗體。由于PGE2示蹤劑的濃度在PGE2濃度變化時保持恒定,因此能夠結合到PGE2單克隆抗體的PGE2示蹤劑的量將與孔中的PGE2濃度成反比。該抗體-PGE2復合物與先前連接到微孔的山羊多克隆抗小鼠IgG結合。清洗培養(yǎng)板以去除任何未結合的試劑,然后將Ellman試劑(含有乙酰膽堿酯酶基質)添加到孔中。該酶反應產物具有明顯的黃色,并在412 nm處強烈吸收。通過分光光度法測定的該顏色的強度與結合到孔中的PGE2示蹤劑的量成正比,該示蹤劑的量與孵化期間孔中存在的游離PGE2的量成反比;該過程的示意圖如下圖所示。

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圖:乙酰膽堿酯酶的示意圖

 

艾美捷 開曼生物 前列腺素E2快速檢測ELISA試劑盒特點

已經證明能在尿液,血液或者培養(yǎng)基樣本中使用.一般情況下,尿液或者培養(yǎng)基樣本需稀釋后,直接用于試劑盒檢測;對于血液樣本,需要預先純化,因為PEG2在血液樣本中會很快代謝掉.

 

艾美捷 開曼生物 前列腺素E2快速檢測ELISA試劑盒檢測標準:

1.0 ml ELISA緩沖液重新配制PGE2 Express ELISA標準品內容物。該溶液(散裝標準品)的濃度將為10納克/毫升。儲存在4°C下;該標準將穩(wěn)定長達四周。

 

注:如果測定未用ELISA緩沖液稀釋至少10倍的培養(yǎng)基樣品,應使用培養(yǎng)基代替ELISA緩沖液稀釋標準曲線和樣品。

 

制備用于ELISA的標準品:獲得八個干凈的試管,并將其編號為#1#8。等分800µl ELISA緩沖液至試管#1500µl ELISA緩沖液至試管#2-8。將200微升散裝標準品(10納克/毫升)轉移到試管#1中,并*混合。標準曲線上的個點,該標準品的濃度為2納克/毫升(2000微克/毫升)。通過從管#1中去除500µl并放置在管#2中連續(xù)稀釋標準溶液;*混合。接下來,從管#2中取出500µl,放入管#3中;*混合。對管道4-8重復此過程。這些稀釋標準品的儲存時間不應超過24小時。


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