關(guān)于細(xì)胞凋亡的檢測工具，市面上屢見不鮮，但是大部分都是針對體外（in vitro）細(xì)胞的，活體(in vivo)細(xì)胞的凋亡檢測卻不多見。艾美捷ImmunoChemistry（ICT）FLIVO探針，能夠用于細(xì)胞凋亡活體檢測，助力科研。

FLIVO(FLuorescence in vIVO)探針是細(xì)胞滲透性、無毒性的天冬氨酸蛋白酶(Caspases)熒光抑制劑，含有纈氨酸－丙氨酸－天冬氨酸(VAD)氨基酸序列，該序列是活性Caspase的靶點(diǎn),夾在熒光標(biāo)記和氟甲基酮(FMK)之間。靜脈注射后，FLIVO通過體循環(huán)，在細(xì)胞中不斷擴(kuò)散。如果細(xì)胞內(nèi)存在活性Caspase，FLIVO將與Caspase上的半胱氨酸形成不可逆的共價(jià)鍵。因此只要細(xì)胞膜完好，結(jié)合的FLIVO探針就會留在細(xì)胞內(nèi)，從而被標(biāo)記上熒光，未結(jié)合的FLIVO則在動物的體循環(huán)中被清除，動物體內(nèi)剩下的信號就是對caspase活性的直接測定。所以FLIVO可以用于檢測活體動物體內(nèi)Caspase介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡、焦亡。FLIVO非常敏感，自然發(fā)生的低水平細(xì)胞凋亡也會被檢測到。  

艾美捷ICT FLIVO探針活體凋亡檢測,包含的FLIVO探針由熒光基團(tuán)、VAD序列和氟甲基酮(FMK)組成夾心結(jié)構(gòu)，熒光基團(tuán)用來檢測熒光，VAD序列是活性caspase靶點(diǎn)，FMK有助于與活性caspase形成共價(jià)鍵。  

圖1：利用FAM-FLIVO監(jiān)測細(xì)胞死亡，健康神經(jīng)元和凋亡神經(jīng)元之間有明顯的區(qū)別。在對糖尿病的活體動物大腦研究中，對照大鼠(左)和8周STZ糖尿病大鼠(右)的caspase活性來評估神經(jīng)退行性變。在大鼠死亡前30分鐘靜脈注射FAM-FLIVO(#981)，直接標(biāo)記caspase陽性凋亡神經(jīng)元。死亡后，制備20um冰凍切片的導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)(PAG)，用紅色熒光Nissl反染色，以識別所有神經(jīng)元。瀕死的凋亡神經(jīng)元(左)顯示FAM-FLIVO(黃/綠色)和Nissl(紅色)雙重染色。在該模型中，糖尿病動物導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)中caspase活性水平高于對照組動物。 

圖2：在小鼠腦內(nèi)接種活金黃色葡萄球菌后誘發(fā)腦膿腫。動物在感染后17小時(shí)靜脈注射NIR-FLIVO 690示蹤劑(#9112)或NIR-FLIVO 690游離染料對照劑(#9113)，然后在1小時(shí)后使用IVIS Spectrum從離體大腦組織中獲得信號。在注射NIR-FLIVO 690示蹤劑(右圖)后，強(qiáng)烈的caspase活性與腦膿腫相關(guān)，而在注射NIR-FLIVO 690游離染料對照劑(左圖)的動物中檢測到極少的信號。

圖3：使用CRi Maestro成像系統(tǒng)，使用NIR-FLIVO 747示蹤劑(#9114)對小鼠腫瘤模型中的凋亡組織進(jìn)行體內(nèi)成像。NIR-FLIVO 747示蹤劑用于無創(chuàng)監(jiān)測一種實(shí)驗(yàn)性抗癌治療的療效和時(shí)間動力學(xué)。在接受安慰劑或?qū)嶒?yàn)治療后，陰性對照小鼠(左圖)和實(shí)驗(yàn)治療小鼠(右圖)靜脈注射NIR-FLIVO 747示蹤劑，并在不同時(shí)間點(diǎn)使用CRi Maestro成像系統(tǒng)進(jìn)行無創(chuàng)成像。實(shí)驗(yàn)組被試的凋亡腫瘤組織呈亮藍(lán)色熒光，表明實(shí)驗(yàn)治療有凋亡效應(yīng)。

以上，是有關(guān)于艾美捷FLIVO探針活體凋亡檢測的相關(guān)研究方案。