PKH26細胞連接試劑盒（用于通用細胞膜標記）是一種基于熒光探針PKH26的測試試劑盒，用于通用細胞薄膜標記。它適用于體外細胞標記、體外細胞增殖和長期細胞追蹤研究。PKH26是一種獲得磚利的具有長疏水性尾部的膜標記探針，可以穩(wěn)定地插入細胞膜的肽區(qū)。PKH26熒光在黃橙色光譜范圍內(nèi)，最大激發(fā)波長為551nm，最大發(fā)射波長為567nm。它與羅丹明或PE檢測系統(tǒng)兼容。它也可以用標準熒光素過濾器激發(fā)，但是熒光強度可能被輕微地降低。PKH26具有最長的體內(nèi)半衰期，超過100天，非常適合體內(nèi)細胞跟蹤、細胞增殖研究和其他長期實驗。此外，PKH26染料已在體外和體內(nèi)跟蹤實驗中成功用于標記染色體和細胞外小泡。

艾美捷PKH26紅色熒光細胞鏈接試劑盒(外泌體染色)基本參數(shù)：

目錄號：B-CHK104

規(guī)格：0.1 mL

儲存：室溫

PKH26紅色熒光細胞鏈接試劑盒(外泌體染色)一般細胞膜標記程序分析：

親脂性染料結(jié)合到細胞膜上進行標記。染色強度是染料濃度和細胞濃度的函數(shù)，與滲透性無關(guān)。因此，確保適量的染料對于避免過度標記至關(guān)重要，這可能導(dǎo)致細胞膜完整性的喪失或細胞活力的降低。

以下程序可用于在體外和體內(nèi)標記細胞，包括干細胞、淋巴細胞、單核細胞、內(nèi)皮細胞、神經(jīng)元或任何其他類型的細胞。體內(nèi)細胞的標記過程可能需要進行某些修飾，如血小板染色或吞噬細胞的選擇性標記。

在下面的染色過程中，細胞濃度和染料濃度表示該過程中使用的初始濃度。這些濃度已被證明適用于各種細胞類型。用戶應(yīng)根據(jù)實驗?zāi)康?，通過評估染色后細胞活力（如PI染色）、熒光強度、染色均勻性以及是否影響所研究細胞的功能，確定最佳染料濃度和細胞濃度。

注1：在PKH26染色過程中，不應(yīng)存在疊氮化物或代謝毒性物質(zhì)。

注2：雖然粘附細胞也可以染色，但單個懸浮細胞可以獲得更好的染色均勻性。因此，對于粘附細胞，建議使用抑肽酶（胰蛋白酶/EDTA）將其消化成單個懸浮細胞，以獲得更好的染色結(jié)果。

以下程序的最終體積為2 mL，PKH26濃度為2×10-6 M，細胞濃度為1×107個細胞/mL。以下所有步驟均在室溫（20-25°C）下進行。

1.將含有2x107個單細胞的懸浮液置于錐形底部聚丙烯管中，并使用不含血清的培養(yǎng)基沖洗。注：血清蛋白質(zhì)和脂質(zhì)也會與染料結(jié)合，從而降低可用于膜粘合的有效濃度。在用DiluentC重懸用于標記（步驟4）之前，用無血清培養(yǎng)基或緩沖液洗滌一次（步驟1）可獲得最佳結(jié)果。

2.將細胞（400x g）離心5分鐘，形成松散的顆粒。注意：PKH26乙醇染料溶液不應(yīng)直接添加到細胞沉淀中。這將導(dǎo)致異質(zhì)性表達和細胞活力降低。

3.離心細胞后，仔細吸取上清液，注意不要去除任何細胞，而是留下25μL的上清液。注：為了獲得可重復(fù)的結(jié)果，當細胞懸浮在稀釋劑C中時，重要的是盡量減少殘留培養(yǎng)基或緩沖液的量。

4.通過向細胞沉淀中加入1mL稀釋劑C制備2x細胞懸浮液，并用溫和移液管重懸以確保完-全分散。不要渦旋，也不要讓細胞長時間停留在稀釋劑C中。注意：生理鹽的存在會導(dǎo)致染料形成膠束，并大大降低染色效率。因此，重要的是在添加染料時將細胞懸浮在稀釋劑C中，而不是懸浮在培養(yǎng)基或緩沖液中。

5.染色前，通過在聚丙烯離心管中向1 mL稀釋劑C中加入4μL PHH26乙醇染料溶液，在稀釋劑C中制備2倍染料溶液（4x10–6 M），并充分混合以分散。

注1：為了最大限度地減少乙醇對細胞活力的影響，步驟5中添加的染料體積應(yīng)在步驟6結(jié)束時產(chǎn)生不超過1-2%的乙醇。

注2：如果需要最終染料濃度為2x10–6 M，則通過用未變性的100%乙醇稀釋試劑盒中提供的PKH26乙醇染料溶液來制備中間染料原液，將獲得最-具重現(xiàn)性的結(jié)果。

6.將1mL的2x細胞懸浮液（步驟4）快速添加到1mL的2x染料溶液（步驟5）中，并立即通過移液管將樣品擠出?；旌现甘倔w積后的最終濃度為1x107細胞/mL和2x10–6MPKH26

注：由于染色幾乎是即時的，細胞在染料溶液中快速均勻的分散對于正確、均勻和可重復(fù)的標記至關(guān)重要。

該試劑僅用于科學(xué)研究領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。