AAT Bioquest 的小麥胚芽凝集素（WGA）能與N-乙酰葡萄糖胺和唾液酸結(jié)合，是目前研究較多且有用的凝集素之一。小麥胚芽凝集素可用于標(biāo)記細(xì)胞膜（如：活細(xì)胞、固定細(xì)胞、組織切片、酵母、革蘭氏陽性細(xì)菌及真菌等 ），從而進(jìn)行熒光成像和分析。也可用于免疫熒光（IF）、免疫組織化學(xué)（IHC）和流式細(xì)胞術(shù)（FC）。

艾美捷mFluor Violet 450小麥胚芽凝集素(WGA)探針：

貨號(hào)：AAT-25500

Ex(nm) 406

Em(nm) 445

溶    劑 Water

存儲(chǔ)條件 在-15℃以下保存，避光防潮

優(yōu)勢(shì)：

1.應(yīng)用廣泛；

2.不受膜電位控制；

3.用于細(xì)胞膜表面的標(biāo)記，有助于膜結(jié)構(gòu)的成像

圖：將HeLa 細(xì)胞用濃度為 10 µg/mL 的 mFluor™ Violet 450小麥胚芽凝集素 (WGA) 探針染色 30 分鐘。使用配備紫羅蘭濾光片組的熒光顯微鏡獲取的圖像。

mFluor Violet 450小麥胚芽凝集素(WGA)探針實(shí)驗(yàn)方案：

樣品分析方案

溶液配制

儲(chǔ)備溶液配制：

mFluor 450 小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物儲(chǔ)備液 (200X)

將 500 µL ddH2O 添加到粉末小瓶中，制成 2 mg/mL 的儲(chǔ)備溶液。

注意：重新配制的綴合物溶液可在 2-8 °C 下短期儲(chǔ)存，或在 -20 °C 下長期儲(chǔ)存。

工作溶液配制：

mFluor 450 小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物工作溶液 (1X)

將 5 μL 200X WGA 儲(chǔ)備溶液添加到 1 mL HHBS 緩沖液中。

注意：不同細(xì)胞系的優(yōu)化染色濃度可能不同。 活細(xì)胞的推薦起始濃度為 5-10 µg/mL。

操作方案

活細(xì)胞染色：

1. 用 HHBS 緩沖液清洗細(xì)胞兩次。

2. 添加 100 µL mFluor 450-WGA 工作溶液。

3. 將細(xì)胞與 WGA 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 分鐘。

4. 用 HHBS 緩沖液清洗細(xì)胞兩次。

5. 使用 Ex/Em = 406/445 nm在熒光顯微鏡上成像細(xì)胞。

固定細(xì)胞染色：

1. 用含4%甲醛的PBS溶液固定細(xì)胞。

注意：對(duì)于固定細(xì)胞膜染色，建議在沒有透化步驟的情況下進(jìn)行染色。固定后透化步驟會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)區(qū)室染色，如高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng) (ER) 結(jié)構(gòu)染色。

2. 添加 100 µL mFluor 450-WGA 工作溶液。

3. 在室溫下，用 WGA 工作溶液孵育細(xì)胞 10-30 分鐘。

4. 用 HHBS 緩沖液清洗細(xì)胞兩次。

5. 使用Ex/Em = 406/445 nm在熒光顯微鏡上成像細(xì)胞。