在兔體內(nèi)產(chǎn)生的針對組蛋白H3的多克隆抗體，使用KLH偶聯(lián)的合成肽在賴氨酸27（H3K27ac）處乙酰化。

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BPS Bioscience銷售產(chǎn)品Anti-H3K27ac多克隆抗體。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Anti-H3K27ac多克隆抗體：

克隆性：多克隆

宿主物種/表達(dá)系統(tǒng)：兔

純化方法：親和純化

形式：水溶液

配方：含有0.05%疊氮化物和0.05% ProClin 300的PBS緩沖液

濃度：50 ?g/42 ?l

免疫原：合成肽

儲存/穩(wěn)定性

在-80°C下可保存長達(dá)2年。分裝以避免反復(fù)凍融。分裝后可在-20°C下保存至少一個(gè)月。

染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）實(shí)驗(yàn)結(jié)果

使用針對H3K27ac的抗體（產(chǎn)品編號25239）和優(yōu)化的qPCR引物組合，在HeLa細(xì)胞中進(jìn)行ChIP實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)使用了100萬細(xì)胞的剪切染色質(zhì)。抗體用量梯度為1、2、5和10 ?g/次ChIP實(shí)驗(yàn)，并進(jìn)行了分析。以2 ?g/IP的IgG作為陰性免疫沉淀對照。定量PCR使用了活性基因ACTB和EIF4A2的啟動(dòng)子引物作為陽性對照，以及非活性基因MYT1和TSH2B的編碼區(qū)引物作為陰性對照。圖1顯示了回收率，以輸入量的百分比表示（免疫沉淀DNA與輸入DNA的相對量，經(jīng)qPCR分析后得出）。這些結(jié)果與H3K27乙?；患诨钚曰騿?dòng)子區(qū)域的觀察結(jié)果一致。

ChIP-seq實(shí)驗(yàn)結(jié)果

使用2 ?g針對H3K27ac的抗體（產(chǎn)品編號25239），在100萬HeLaS3細(xì)胞的剪切染色質(zhì)上進(jìn)行ChIP實(shí)驗(yàn)。定量PCR使用了活性基因ACTB和EIF4A2的啟動(dòng)子引物作為陽性對照，以及非活性基因MYT1和MB的編碼區(qū)引物作為陰性對照（圖2A）。隨后，免疫沉淀的DNA在Illumina基因組分析儀上進(jìn)行分析。文庫制備、簇生成和測序均按照制造商說明進(jìn)行。36 bp的標(biāo)簽通過ELAND算法與人類基因組比對。圖2B顯示了沿完整X染色體的峰分布，以及圍繞ACTB和EIF4A2陽性對照基因的兩個(gè)區(qū)域的分布（圖2C和D）。

抗體滴度測定

為了測定抗體滴度，使用針對H3K27ac的抗體（產(chǎn)品編號25239）在抗原包被的孔中進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)，抗體進(jìn)行梯度稀釋。使用的抗原是含有目標(biāo)組蛋白修飾的肽段。通過繪制吸光度與抗體稀釋度的關(guān)系圖（圖3），估計(jì)抗體滴度為1:4000。

點(diǎn)雜交分析

使用針對H3K27ac的抗體（產(chǎn)品編號25239）進(jìn)行點(diǎn)雜交分析，測試其與其他組蛋白修飾肽段以及未修飾的H3K27序列的交叉反應(yīng)性。將100至0.2 pmol的相應(yīng)肽段點(diǎn)在膜上，抗體稀釋度為1:25000。圖4顯示抗體對目標(biāo)修飾具有高特異性。

Western Blot分析

使用針對H3K27ac的抗體（產(chǎn)品編號25239），對HeLa細(xì)胞的全細(xì)胞裂解物（40 ?g，泳道1）和組蛋白提取物（15 ?g，泳道2），以及1 ?g的重組組蛋白H2A、H2B、H3和H4（分別對應(yīng)泳道3、4、5和6）進(jìn)行Western Blot分析?？贵w在含有5%脫脂奶粉的TBS-Tween中稀釋1:1000。右側(cè)標(biāo)記了目標(biāo)蛋白的位置，左側(cè)顯示了分子量標(biāo)記（單位：kDa）。

免疫熒光分析

HeLa細(xì)胞用針對H3K27ac的抗體（產(chǎn)品編號25239）和DAPI進(jìn)行染色。細(xì)胞用4%甲醛固定10分鐘，并用含有5%正常山羊血清和1% BSA的PBS/TX-100進(jìn)行封閉。細(xì)胞用H3K27ac抗體（左側(cè)）在封閉液中稀釋1:500進(jìn)行免疫熒光標(biāo)記，隨后用與Alexa488偶聯(lián)的抗兔抗體進(jìn)行二抗標(biāo)記。中間圖顯示了DAPI對細(xì)胞核的染色。右側(cè)圖顯示了兩種染色的合并圖像。

應(yīng)用

ChIP/ChIP-seq（1 - 2 ?g/ChIP）

ELISA（1:100）

點(diǎn)雜交（1:25000）

Western Blot（1:1000）

免疫熒光（1:500）

運(yùn)輸溫度：-20°C或-80°C

物種反應(yīng)性：人

備注：每次免疫沉淀的抗體優(yōu)良用量應(yīng)由終端用戶確定。建議測試1 - 5 ?g/次。

注意事項(xiàng)：避免反復(fù)凍融。

科學(xué)分類：抗體

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用

產(chǎn)品數(shù)據(jù)庫：

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認(rèn)證的生命科學(xué)領(lǐng)域的供應(yīng)商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動(dòng)新的藥物發(fā)現(xiàn)a。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學(xué)、CRISPR、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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Anti-H3K27ac多克隆抗體Anti-H3K27ac多克隆抗體