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技術(shù)文章

E-Z 96植物DNA協(xié)議真空歧管處理

閱讀:612          發(fā)布時間:2018-7-17

實驗方法:

注:以下協(xié)議是基于使用OBI的真空歧管(產(chǎn)品編號VAC-03)。
1。按照制造商的指示設(shè)置真空歧管。
2。將廢物收集托盤放置在真空歧管內(nèi),然后將E-Z 96®DNA板放置在歧管的頂部。
三。將整個樣品(包括任何可能形成的沉淀物)應(yīng)用于E-Z 96®DNA板。
注意:在這個階段標(biāo)記E-Z 96®DNA板和收集板是很好的主意,以便它們可以在整個協(xié)議中被容易地識別。
*不要觸摸威爾斯的邊緣與吸管提示,以避免交叉污染。
4。打開真空歧管并通過真空過濾樣品混合物。關(guān)掉真空。
5。通過使用多通道吸管將700 UL DNA洗滌緩沖液加入E-Z 96®DNA板的每個孔中。打開真空直到所有液體通過板。(在使用前用EtOH稀釋DNA洗滌緩沖液。)
6。通過重復(fù)步驟5,用另一種700 UL DNA洗滌緩沖液洗滌該板。
7。重復(fù)步驟6通過用400 UL 100%乙醇洗滌板。繼續(xù)真空直到E-Z 96®DNA板*干燥。
8。從歧管移除E-Z 96®DNA板,并在一堆紙巾上輕敲,以除去任何殘余的乙醇。丟棄流過和收集板。
注:在洗脫前*干燥E-Z 96®DNA板是非常重要的。如果有一個擺動斗式離心機(jī)和96個孔板適配器,離心機(jī)在4000×10分鐘內(nèi)干燥板。
9。通過放置一個新的300 UL收集板(供應(yīng))在真空歧管內(nèi)組裝歧管。如果使用Omega VAC-03,一個800 UL板應(yīng)該放置在300 UL板下以獲得適當(dāng)?shù)南疵摳叨取?br />10將E-Z 96®DNA板放置在真空歧管上。
11。為了洗脫DNA,使用多通道吸管將100 UL預(yù)熱(65°C)洗脫緩沖液加入到每個孔中。在室溫下孵育5分鐘。應(yīng)用真空將DNA洗脫到收集板中。
提示:100 UL水或TE緩沖液足以洗脫E-Z 96®DNA板的每個阱中85%的DNA。第二次洗脫步驟,加入100的含UL的含UL的DNA,再加熱至65℃,可提高產(chǎn)率達(dá)10-15%。
總DNA產(chǎn)量取決于樣品的類型和數(shù)量。通常,可以使用10毫克干燥組織分離5-10ug DNA,其A260/A280比為1.7~1.9。

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