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Bradford法檢測蛋白濃度專題

考馬斯亮藍法也稱考馬斯藍染色法(coomassie blue staining)又稱Bradford法。由于其突出的優(yōu)點，正得到越來越廣泛的應用。

考馬斯亮藍G-250(Coomassie brilliant blue G-250)測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結合法的一種。在游離狀態(tài)下呈紅色，大光吸收在488nm;當它與蛋白質(zhì)結合后變?yōu)榍嗌?，蛋白質(zhì)-色素結合物在595nm波長下有大光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，因此可用于蛋白質(zhì)的定量測定。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍G-250結合在2min左右的時間內(nèi)達到平衡，完成反應十分迅速;其結合物在室溫下1h內(nèi)保持穩(wěn)定。該法是1976年Bradford建立，試劑配制簡單，操作簡便快捷，反應非常靈敏，靈敏度比Lowry法還高4倍，可測定微克級蛋白質(zhì)含量，測定蛋白質(zhì)濃度范圍為0～1 000μg/mL，小可測2.5μg/mL蛋白質(zhì)，是一種常用的微量蛋白質(zhì)快速測定方法。

考馬斯亮藍有G250和R250兩種。其中考馬斯亮藍G250由于與蛋白質(zhì)的結合反應十分迅速，常用來作為蛋白質(zhì)含量的測定?？捡R斯亮藍R250與蛋白質(zhì)反應雖然比較緩慢，但是可以被洗脫下去，所以可以用來對電泳條帶染色。

注意：

考馬斯亮藍和皮膚中蛋白質(zhì)通過范德華力結合，反應快速，并且穩(wěn)定，無法用普通試劑洗掉。待一兩周左右，皮屑細胞自然衰老脫落即可無礙。