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技術(shù)文章

新型大鼠、小鼠心臟干細(xì)胞(祖細(xì)胞)分離培養(yǎng)方法

閱讀:429          發(fā)布時(shí)間:2018-9-20

心臟病是引起人類死因的一種代表性疾病,如果失去了心肌細(xì)胞,就會(huì)引起心力衰竭等心臟疾病。心肌細(xì)胞幾乎沒(méi)有再生能力,一旦失去就不能再生。從前認(rèn)為心臟當(dāng)中沒(méi)有干細(xì)胞,所以心肌沒(méi)有再生能力,但是近年的研究表明,成體心臟內(nèi)部也會(huì)存在一些心肌干細(xì)胞。賽百慷公司開(kāi)發(fā)出一種新型心肌干細(xì)胞培養(yǎng)方法,希望能為這項(xiàng)研究的科學(xué)工作者提供幫助。

     
       細(xì)胞培養(yǎng)操作:
       1.摘取出心臟,去掉心臟包膜,把心尖部分剪下來(lái)(心尖部分是心室部分,心肌細(xì)胞含量高)。
       2.剪碎,移入15或50ml離心管中,用PBS多洗幾遍,盡量把血細(xì)胞洗掉。
       3.加入2-3ml的50%血清+50%IMDM培養(yǎng)基,37℃、一小時(shí)浸泡。
       4.采用貼塊法:用槍把組織塊連同培養(yǎng)基一同移入T25瓶中,然后用槍吸出培養(yǎng)基。在培養(yǎng)箱中放置1-2小時(shí),待組織粘貼在瓶底后,加入3ml含20%血清的IMDM培養(yǎng)基。
       5.在貼塊培養(yǎng)到第三、四天時(shí),從組織塊上會(huì)脫落一些細(xì)胞團(tuán)和單個(gè)細(xì)胞,收集到15ml離心管中。
       6.采用300rpm離心(或自然沉淀),去上清,取沉淀部分的細(xì)胞培養(yǎng)(多為細(xì)胞團(tuán))。
       7.用IMDM/DMEM/F12*培養(yǎng)基培養(yǎng):10%血清、30%IMDM、60%DMEM/F12、0.1mM β-ME、50xB27、20ng/ml bFGF、10ng/ml EGF。
       8.細(xì)胞團(tuán)中的細(xì)胞在第二天就會(huì)出現(xiàn)圓形擴(kuò)散生長(zhǎng)(呈集落生長(zhǎng),像太陽(yáng)發(fā)光的模樣),細(xì)胞形態(tài)不像成纖維細(xì)胞那樣呈梭形狀,而是有些偏圓。

       9.心臟干細(xì)胞生長(zhǎng)速度很快,兩三天就能長(zhǎng)滿。

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