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技術文章

EA.hy926人臍靜脈融合細胞

閱讀:525          發(fā)布時間:2018-12-20

培養(yǎng)操作及注意事項說明

 

 

.產(chǎn)品簡介

 

1、細胞名稱EA.hy926人臍靜脈融合細胞

EA.hy926人臍靜脈融合細胞描述 :在PEG脅迫下,將原代培養(yǎng)的人臍靜脈細胞與抗硫鳥嘌呤的A549克隆株融合,構建了人臍靜脈細胞株, EA.hy926。 融合子在HAT培養(yǎng)基上生長并以八因子相關抗原篩選。 EA.hy926已經(jīng)過100次以上的群體倍增(PDLs)。 電鏡照片顯示W(wǎng)eibel-Palade小體的細胞質(zhì)分布以及組織特異性的細胞器,分化的內(nèi)皮細胞特性如血管生成,體內(nèi)平衡/血栓形成,血壓及炎癥反應。 

  1. 生長特性:成纖維細胞 
  2. 組織來源:組織: 體細胞融合子
  3. 細胞形態(tài):內(nèi)皮細胞    

3、細胞生長條件:

培養(yǎng)條件   

90%RPMI-1640+10%FBS+1%P/S

溫度                   

             37℃

空氣條件  

           5% CO2,100% AIR

傳代方法

1:2傳代,2~3天換液

凍存條件

90%FBS+10%DMSO

二.使用方法

1、收到細胞后,請按照以下方法進行操作

取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入37,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài),然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

 

2、細胞傳代:

1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3)棄上清,沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸,然后1:2比例進行分瓶傳代,放入37,5%CO2胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

4)待細胞*貼壁后,觀察培養(yǎng)結果,之后進行換液培養(yǎng)或傳代

3、細胞凍存:

1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min

3)用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細胞,并放置于凍存管中;

4)先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80。 

4、細胞復蘇:
1)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37水浴中解凍,直至凍存管中結晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2)將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中, 1000rpm離心5min;

3)棄上清,沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸,接種25cm2培養(yǎng)瓶,于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

4)第二天,換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

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