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技術(shù)文章

EA.hy926人臍靜脈融合細(xì)胞

閱讀:520          發(fā)布時(shí)間:2018-12-20

培養(yǎng)操作及注意事項(xiàng)說明

 

 

.產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

1、細(xì)胞名稱EA.hy926人臍靜脈融合細(xì)胞

EA.hy926人臍靜脈融合細(xì)胞描述 :在PEG脅迫下,將原代培養(yǎng)的人臍靜脈細(xì)胞與抗硫鳥嘌呤的A549克隆株融合,構(gòu)建了人臍靜脈細(xì)胞株, EA.hy926。 融合子在HAT培養(yǎng)基上生長(zhǎng)并以八因子相關(guān)抗原篩選。 EA.hy926已經(jīng)過100次以上的群體倍增(PDLs)。 電鏡照片顯示W(wǎng)eibel-Palade小體的細(xì)胞質(zhì)分布以及組織特異性的細(xì)胞器,分化的內(nèi)皮細(xì)胞特性如血管生成,體內(nèi)平衡/血栓形成,血壓及炎癥反應(yīng)。 

  1. 生長(zhǎng)特性:成纖維細(xì)胞 
  2. 組織來源:組織: 體細(xì)胞融合子
  3. 細(xì)胞形態(tài):內(nèi)皮細(xì)胞    

3、細(xì)胞生長(zhǎng)條件:

培養(yǎng)條件   

90%RPMI-1640+10%FBS+1%P/S

溫度                   

             37℃

空氣條件  

           5% CO2,100% AIR

傳代方法

1:2傳代,2~3天換液

凍存條件

90%FBS+10%DMSO

二.使用方法

1、收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作

取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入37,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代

 

2、細(xì)胞傳代:

1)細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3)棄上清,沉淀細(xì)胞用12ml*培養(yǎng)基重懸,然后1:2比例進(jìn)行分瓶傳代,放入37,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

4)待細(xì)胞*貼壁后,觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細(xì)胞凍存:

1)細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細(xì)胞使之脫落然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min

3)用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中;

4)先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80。 

4、細(xì)胞復(fù)蘇:
1)從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37水浴中解凍,直至凍存管中結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2)將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中, 1000rpm離心5min;

3)棄上清,沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸,接種25cm2培養(yǎng)瓶,于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

4)第二天,換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

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