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技術(shù)文章

SCL-1人皮膚磷癌細(xì)胞培養(yǎng)方法

閱讀:547          發(fā)布時(shí)間:2018-12-25

培養(yǎng)操作及注意事項(xiàng)說(shuō)明

 

 

.產(chǎn)品簡(jiǎn)介

SCL-1人皮膚磷癌細(xì)胞培養(yǎng)方法

1、細(xì)胞名稱SCL-1;人皮膚磷癌細(xì)胞

 

2、生長(zhǎng)特性:    □ 貼壁   □ 懸浮   □半懸浮半貼壁

 

3、細(xì)胞生長(zhǎng)條件:

培養(yǎng)條件   

90%RPMI-1640+10%FBS+1%P/S

溫度                   

             37℃

空氣條件  

           5% CO2,100% AIR

傳代方法

1:2傳代,2~3天換液

凍存條件

90%FBS+10%DMSO

二.使用方法SCL-1人皮膚磷癌細(xì)胞培養(yǎng)方法

1、收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作

取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入37,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。

 

2、細(xì)胞傳代:

1)細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3)棄上清,沉淀細(xì)胞用12ml*培養(yǎng)基重懸,然后1:2比例進(jìn)行分瓶傳代,放入37,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

4)待細(xì)胞*貼壁后,觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細(xì)胞凍存:SCL-1人皮膚磷癌細(xì)胞培養(yǎng)方法

1)細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3)用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中;

4)先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過(guò)夜,24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80。 

4、細(xì)胞復(fù)蘇:
1)從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37水浴中解凍,直至凍存管中無(wú)結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2)將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中, 1000rpm離心5min;

3)棄上清,沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸,接種25cm2培養(yǎng)瓶,于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

4)第二天,換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。SCL-1人皮膚磷癌細(xì)胞培養(yǎng)方法

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